方法摘要:
Venusil AA 氨基酸分析的原理为目前广泛使用的PITC(异硫氰酸苯酯)衍生法。经过简化后的衍生方法有很多优点:方便、快速;衍生物单一、稳定,-20℃可贮存数月;采用Venusil AA 柱分析时间短;结果准确;试剂、副产物、溶剂等多种干扰因素可通过快速萃取去除;紫外检测(254nm)灵敏度高。
样品:
取某品牌牛奶0.5g,按照博纳艾杰尔氨基酸分析方法包进行水解衍生,并取混合氨基酸标准溶液(准确量取氨基酸标准溶液1.0 mL,置于5mL容量瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液定容至刻度)加内标正亮氨酸,然后进行衍生。(异硫氰酸苯酯为衍生剂)
色谱柱:Agela Venusil AA,4.6×250mm,5µm,100Å(订货号:VA952505-K)
流动相:A:称取15.2g无水醋酸钠,加水1850mL,溶解后用冰醋酸调pH至6.5,然后加乙腈140mL,混匀,用0.45µm滤膜过滤。
B:80%(V/V)乙腈溶液
时间 | 流动相A |
0 | 0 |
2 | 0 |
15 | 10 |
25 | 30 |
33 | 45 |
33.1 | 100 |
39 | 100 |
39.1 | 0 |
45 | 0 |
流速:1.0mL/min
进样体积:10μL
温度:40℃
波长:254nm
Agela Venusil AA HPLC法测定牛奶中羟脯氨酸混和标准品图谱 (6.50min为羟脯氨酸)
Agela Venusil AA HPLC法测定牛奶中羟脯氨酸图谱(6.51min为羟脯氨酸)
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