告别繁琐紧张的移液工作

告别繁琐紧张的移液工作-eppendorf高通量PCR自动移液工作站简介

　　PCR反应样品的准备和加样过程在整个PCR反应中是非常重要的操作。手工加样操作很难保证每孔加样的准确性和精确性。只有自动化的加样工作站才能确保微量加样的可靠性。

　　20年前，Kary Mullis 发明了聚合酶链反应（PCR），在生命科学研究和医药多个应用领域引起了重大的变革。从那时起，这种DNA复制新技术就不断在发展。 最新的例子，就是应用到重症急性呼吸道综合症（SARS）的检测。借助聚合酶链反应，准确无误地检测到冠状病毒病原体。PCR 反应特征需要特殊的条件和技巧。实际工作中，PCR可以扩增10～100个DNA分子，这种高灵敏性和特异性的PCR具有很高的应用价值。PCR反应样品的准备和加样过程在整个PCR反应中是非常重要的操作。手工加样操作很难保证每孔加样的准确性和精确性。特别是384孔板孔间的距离只有4.5mm，因此对加样者的熟练度要求非常高。只有自动化的加样工作站才能确保如此微量加样的可靠性。

　　告别繁琐紧张的移液工作

　　许多分子生物学方法实现了自动化，自动化的领域仍在不断扩大，已经开始替代传统的手工操作方法。

　　Eppendorf的移液工作站epMotion® 5070用于实时定量PCR（qPCR）体系与手工方法的qPCR体系进行比较。移液工作站epMotion 5070参与的操作包括标准的梯度稀释、一系列转移液体，以及加样到反应孔等等。

　　为扩增特异性靶基因，并检测出扩增信号，将使用Eppendorf的RealMasterMix Probe试剂，它是唯一经过优化的、用于水解探针为检测原理的qPCR，其特点是自有ZL的HotMaster® TaqDNA聚合酶适合常温下的PCR反应建立。

　　使用两个qPCR平台：ABI Prism 7000SD(Applied Biosystem，Foster City，CA,USA)和Bio-Rad iCycler iQ（Bio-Rad，Hercules，CA，USA）。

　　简而言之，用Eppendorf自动移液工作站epMotion® 5070参与的实时qPCR系统，与手工方法的PCR相比较，手工操作的常见缺陷可以减少，同时提高可重复性和准确性，以及全面减少污染的可能性。

　　轻松完成加样工作

　　经常用 96 孔或者 384 孔板做 PCR 实验，或者经常处理酶标板的工作者，一定体会到，做此类试验需要注意力高度集中。时间长了，感觉精疲力尽。在操作此类试验时，经常发生一些失误。比如，换完吸嘴后，忘记了第 23 栏孔是否已经加好引物？从而不知道是从 22 栏开始，还是从23栏开始？有了epMotion 5070 小型自动加样工作站，就不会再出现诸如此类的问题。在短短的7min里，就可以将实验需要的试剂，如 HotMasterMix，分子生物学级别的纯净水，或者 96 种不同的样品等加入到96孔板。如果是384孔板，可能需要 21min，这是因为epMotion5070 是一台小型的加样工作站。假如是将同一种样品分到 96 孔，整个过程只需2 min！

　　完美组合

　　自动加样工作站可以应付所有的重复加样工作，这是毫无疑问的。如果配合 Eppendorf 其他产品如试剂和耗材，即可为 PCR 实验提供一个完美的实验条件。如采用 Eppendorf的HotMasterMix 即用型试剂盒作热启动的 PCR 反应，这种情况非常适合自动加样工作站处理。因为 HotMaster 热启动酶可以储存在普通的冰箱中，无需事先解冻，而且该试剂盒可以长时间置于工作台中，无需冷却。其热启动性能特征防止酶与其他成分的预反应。原因是 HotMaster 试剂盒有ZL的HotStart / Cold Stop技术，可以在整个PCR 循环过程中达到热启动/冷终止的效果。有别于其他传统的热启动试剂盒。而其他品牌的热启动酶，经 95℃孵育激活后，不能恢复低温时阻断 Taq聚合酶的功能。而且使用该试剂盒，无需摸索合适的镁离子浓度，因为MasterMix 的缓冲液系统具有自我调节镁离子浓度的功能，可以适合各种PCR的反应条件。

　　96，384 twin.tec PCR 板尤其适合自动加样系统，符合SDS 标准。twin.tecPCR 板的边缘是聚碳酸酯材质，薄壁孔壁是聚丙烯材质。这样的材质和制作工艺，可耐受高温和机械的压力，实验偏差小。

　　自动加样对吸嘴的材质和形状要求很高。epMotion 专用的吸嘴 epT.I.P.S放置于无污染的吸嘴盒，且分为优质级和 PCR 洁净级两种不同纯度的吸嘴套装。根据实验需要，还可以选择有滤芯和无滤芯的吸嘴。

　　不再乏味

　　最值得庆幸的是，无需担心加样重复性，也不用再为忘记加样次序的问题烦恼。从此这种乏味的，但又必须不断重复的工作，交给 epMotion 了，不仅自动化程度高，而且结果可靠。