分光光度法检测食品中二氧化硫

食品中二氧化硫的测定方法

测定二氧化硫的主要方法有：盐酸副玫瑰苯胺比色法、蒸馏滴定法、碘量法等。

2.1  盐酸副玫瑰苯胺光度法测定二氧化硫

2.1.1 原理：

二氧化硫(或来自亚硫酸盐)被四氯汞钠吸收后，生成稳定的络合物，再与甲醛和盐酸副玫瑰苯胺作用，并经分子重排后，生成紫红色的络合物。颜色的深浅与二氧化硫的浓度成正比，可以比色测定。

本方法使用于各类食品中游离型和结合型硫酸盐残留量的测定。方法操作

简单、快速、灵敏度高，再现性良好。

2.1.2 试剂：

(1)5mol/L氢氧化钠溶液；0.5mol/L硫酸溶液；12g/L氨基磺酸铵溶液。

(2)四氯汞钠吸收液：称取13.6g氯化高汞及6g氯化钠，溶于水中并稀释至1000m1，放置过夜，过滤后备用。

(3)甲醛溶液：吸取0.55m1无聚合沉淀的36％甲醛，加水99.45ml稀释，混匀。

(4)淀粉指示液：称取1g可溶性淀粉，用少量水调成糊状，缓缓倾入100m1沸水中，随加随搅拌，煮沸，放冷备用，此溶液临用时现配。

(5)亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾[K Fe(CN) ，·3H 0]，加水溶解并稀释至100m1。

(6)乙酸锌溶液：称取22g[Zn(CH COO) ·2H20]，溶于少量水中，加入3m1冰乙酸，加水稀释至100m1。

(7)盐酸副玫瑰苯胺溶液：称取0.1gC H N Cl·4H20于研钵中，加少量水研磨使溶解并稀释至100ml。取出20ml，置于100ml容量瓶中，加盐酸溶液6mol／L，充分摇匀后使溶液由红变黄，如不变黄再滴加少量盐酸至出现黄色，再加水稀释至刻度，混匀备用(如无盐酸副玫瑰苯胺可用盐酸晶红代替)。

    盐酸副玫瑰苯胺的精制方法：称取20g盐酸副玫瑰苯胺于400m1水中，用50ml盐酸溶液2mol／L酸化，徐徐搅拌，加4—5g活性炭，加热煮沸2min。将混合物倒入大漏斗抽滤，过滤(用保温漏斗趁热过滤)。滤液放置过夜，出现结晶，然后再用布氏漏斗抽滤，将结晶再悬浮于1000ml乙醚—乙醇(10:1)的混合物中，振摇3—5min，以布氏漏斗抽滤，再用乙醚反复洗涤至醚层不带色为止。于硫酸干燥器中干燥，研细后储存于棕色瓶中保存。

    (8)0.1mol／L碘溶液。

(9)0.1mol／L硫代硫酸钠标准滴定溶。

(10)二氧化硫标准储备溶液：称取0.5g亚硫酸钠，溶于200m1四氯汞钠吸收液中，放置过夜，上清液用定量滤纸过滤备用。

    吸取10m1亚硫酸氢钠—四氯汞钠溶液于250ml碘量瓶中，加100m1水，准确加水20m1碘溶液和5m1冰乙酸，摇匀，放置暗处2min后，迅速以硫代硫酸钠标准滴定溶液0.1mol／L滴定至淡黄色。加0.5ml淀粉指示剂，继续滴至无色。另取100m1水，准确加入20ml碘溶液，加5ml冰乙酸，按同一方法做空白试验。

    计算：C=[(V —V )×C ×32.03]/10

    式中：C为二氧化硫标准溶液浓度(mg／m1)；C 为硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度(mol／L)；V 为测定用二氧化硫标准溶液消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液体积(m1)；V 为试剂空白消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液体积(ml)；32.03为与1ml硫代硫酸钠标准滴定溶液[c(Na S O )=1 mol /L]相当的二氧化硫的质量(mg)。

    (11)二氧化硫标准使用溶液：临用前将二氧化硫储备溶液以四氯汞钠吸收液稀释成每毫升含2ug二氧化硫。

2.1.3 仪器：UV-1300型紫外可见分光光度计。

2.1.4 操作方法：

    (1)样品处理：水溶性固体样品如白糖等，可称取10g均匀样品(样

品量可视含量高低而定)，以少量水溶解，置于100m1容量瓶中，加入4m1 0.5mol／L氢氧化钠溶液，5min后加入4 m1 0.5mol／L硫酸溶液，然后加入20m1四氯汞钠吸收液，以水稀释至刻度。

其他固体如饼干、粉丝等，称取5—10g研磨均匀的样品，以少量水湿润并移人100m1容量瓶中，然后加入20ml四氯汞钠吸收液，浸泡4h以上，若上层溶液不澄清，可加入亚铁氰化钾及乙酸锌溶液各2.5m1，最后用水稀释至刻度，过滤后备用。

    液体样品如葡萄酒等：直接吸取血样品5—10ml，置于100 ml容量瓶中，以少量水稀释，加20ml四氯汞钠吸收液，最后加水到刻度，摇匀，必要时过滤备用。

    (2)测定：吸取0.5—5m1上述样品处理液于25ml具塞比色管中。

    另取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.5、2m1二氧化硫标准使用液(相当于0、0.4、0.6、0.8、1.2、1.6、2、3、4ug二氧化硫)，分别置于25m1具塞比色管中。

    于样品及标准管中各加四氯汞钠吸收液至10ml，然后加入1ml 12g／L氨基磺酸铵溶液、1m1甲醛溶液及1m1盐酸副玫瑰苯胺溶液，摇匀，放置20min。用1cm比色杯以零管调节零点，于波长550nrn处测吸光度，并绘制标准曲线。

2.1.5 计算：

X=(m×1000)/[W ×V/100×1000×1000]

    式中：X为测试样中二氧化硫的含量（g／kg）；m为测定用样液中二氧化硫的质量；W为试样质量（g）；V为测定用样液的体积（ml）

2.2 碘量法测定二氧化硫测定

2.2.1原理：

样品中的二氧化硫(包括游离型和结合型的)，加入氢氧化钾破坏其结合状态，并使之稳定。加入硫酸又使二氧化硫游离，然后用碘标准滴定溶液滴定。到达终点时，过量的碘即与淀粉指示剂作用，生成蓝色碘—淀粉复合物。根据碘标准滴定溶液的消耗量计算出二氧化硫的含量。反应式如下：

    SO +2KOH→K SO +H O

    K SO 十H SO →K SO + H O +SO

    SO 十2 H O +I →H SO 十2HI

    本方法适用于食品中游离型和结合型二氧化硫含量的测定。

2.2.2 试剂：

    (1)1mol／L氢氧化钾溶液：称取57g氢氧化钾溶于蒸馏水中，加水至1000ml。

    (2)25％硫酸溶液。

    (3)0.1mol／L碘标准滴定溶液。

    (4)10g／L淀粉溶液。

2.2.3仪器：250血碘量瓶。

2.2.4操作方法：

称取样品20g(固体样品研细)，置于小烧杯中，用蒸馏水洗人250m1容量瓶中，加蒸馏水至总容量的二分之一，加塞振荡，再加水至刻度，摇匀。待瓶内液体澄清后，用移液管吸取澄清液50ml注入250ml碘量瓶中，加入25m1 1mol／L氢氧化钾溶液。将瓶内混合液用力振荡后放置10min，然后一边振摇一边加入10ml 25％硫酸溶液和淀粉溶液1ml，以碘标准滴定溶液滴至呈现蓝色并30s不褪色为止。同时以蒸馏水代替样品按上法做空白试验。

2.2.5计算：

X=[(V —V )C×0.032×1000]/(W×V /V )

式中：X为样品中二氧化硫的含量(g／k8)；C为碘标准滴定溶液的浓度(mol／L)；V 为滴定样品溶液消耗碘标准滴定溶液的体积(ml)；V 为滴定空白溶液消耗碘标准滴定溶液的体积(m1)；W为样品质量（g）； V 为样品处理液总体积（ml）；V 为测定用样品处理液体积（ml）；0.032为与1ml 1mol/L碘标准滴定溶液相当的二氧化硫的质量（g）。

2.3  蒸馏滴定法测定二氧化硫

2.3.1原理：

在密闭容器中对样品进行酸化并加热蒸馏，以释放出其中的二氧化硫，释放物用乙酸铅溶液吸收。吸收后用浓盐酸酸化，再以碘标准溶液滴定，根据所消耗的碘标准溶液量计算出样品中二氧化硫含量。

2.3.2测定方法：

固体样品用刀切或剪刀剪成碎末后混匀，称取约5．00g均匀样品(样品量可视含量高低而定)。液体样品可直接吸取5—10mL样品，置于500mL圆底蒸馏烧瓶中。将称好的样品置人圆底蒸馏烧瓶中，加入250mL水，装上冷凝装置，冷凝管下端应插入碘量瓶中的25mL乙酸铅(20g／L)吸收液中，然后在蒸馏瓶中加入10mL盐酸(1+1)，立即盖塞，加热蒸馏。当蒸馏液约200mL时，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏lmin。用少量蒸馏水冲洗插入乙酸铅溶液的装置部分。向取下的碘量瓶中依次加入10mL浓盐酸、lmL淀粉指示液(10g／L)。摇匀之后用碘标准滴定溶液(0.01mol／L)滴定至变蓝，且在30s内不退色为止。在检测样品的同时要做空白试验。

2.3.3 计算：

计算公式如下：

X=[( V —V )×0.01×0.032×100]/m

式中：X为样品中二氧化硫总含量(g/kg)；V 为滴定样品所用碘标准滴定溶液的体积（mL）；V 为滴定试剂空白所用碘标准滴定溶液的体积（mL）； m为样品质量（g）；0.032为1/2 SO 的毫摩尔质量g／mmol；0.01为滴定时所用I 标准溶液的浓度(mol／L)。