化学发光法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志的性能探讨

　　乙型肝炎病毒属于嗜肝DNA病毒科，是一种DAN病毒，易感染群体为人类和大猩猩，是引发乙型病毒性肝炎的主要病毒[1]。相关临床数据调查显示我国乙型肝炎感染率为60%～70%，约有7%的人口携带乙肝表面抗原，照此计算，我国约有9300万人携带乙型肝炎病毒[2]。早期我国临床多采用酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志，检测准确性较低。随着医学技术的不断进步，近年来化学发光技术被广泛应用于乙型肝炎病毒感染血清学标志检测中，笔者所在医院本次针对光激化学发光法在乙型肝炎病毒感染血清学标志检测中的应用性能进行了研究和评价，现做出以下整理报道。 
　　1 资料与方法 
　　1.1 一般资料 
　　纳入2014年9月-2015年2月来笔者所在医院接受体检的60例乙型肝炎病毒感染患者参与本次研究，60例患者中，男32例，女28例，年龄19～71岁，平均（42.4±1.5）岁。60例患者均在参与研究前详细知晓笔者所在医院本次研究内容，为自愿性参与本次研究，且在参与研究前均已签署临床研究知情同意书。 
　　1.2 研究方法 
　　1.2.1 血液样本 于清晨采集60例患者的空腹静脉血，使用离心机以3000 r/min的速度分离血清，并保存在零下4 ℃的冰箱中待测。乙型肝炎病毒五项血清学标志包括HBsAg（乙型肝炎表面抗原）、抗HBs（乙型肝炎表面抗体）、HBeAg（乙型肝炎e抗原）、抗HBe（乙型肝炎e抗体）和抗HBc（乙肝核心抗体）。 
　　1.2.2 仪器及试剂 光激化学发光法所使用的检测仪器为博阳生物科技（上海）有限公司生产的高通量免疫分析仪、仪器配套试剂和全自动移液器。化学发光微粒子免疫分析法所使用的检测仪器为美国雅培制药有限公司诊断产品部生产的i2000SR免疫发光检测仪和仪器配套试剂。分别使用上述两种仪器检测 
　　60例乙型肝炎病毒感染患者的五项血清学标志。 
　　1.3 阳性判定标准 
　　1.3.1 光激化学方光 抗HBc：>5.3 PEIU/ml；HBsAg：>0.2 IU/ml；抗HBs：>10 mIU/ml；HBeAg：>1 PEIU/ml；抗HBe：>2 PEIU/ml。 
　　1.3.2 化学发光微粒子免疫分析法 抗HBc：>1 S/CO；HBsAg：抗>0.5 IU/ml；抗HBs：>10 mIU/ml；HBeAg：>1 S/CO；抗HBe：<1 S/CO。 
　　1.4 统计学处理 
　　采用SPSS 22.0软件对所得数据进行统计分析，计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。 
　　2 结果 
　　检测发现光激化学发光法检测乙型肝炎病毒感染患者血清学标志HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe的阳性率分别为91.7%、88.3%、93.3%和86.7%，与采用化学发光微粒子免疫分析法检测的93.0%、85.0%、90.0%和91.7%比较差异均无统计学意义（P>0.05），但检测抗HBc的阳性率为63.3%，明显低于化学发光微粒子免疫分析法的85.0%，两者比较差异有统计学意义（P<0.05），具体见表1。 
　　3 讨论 
　　酶联免疫吸附法为我国临床检测乙型肝炎病毒感染血清学标志的常用方法，该种检测方法所具有的临床优势主要表现为可以最大程度的避免对环境和患者机体的危害、操作简单、试剂有效期长，但因其灵敏度重复性较化学发光法差，酶纯度和反应过程易受到环境的影响，假阳性检出率和漏检率较高，现阶段逐渐被化学发光法所取代[3]。目前临床上比较常用的化学发光法主要为光激化学发光法[4]。光激化学发光法的检测原理为单线态氧分子能量传递发光免疫分析技术，并在此技术上应用了纳米级颗粒，不仅可以有效增加生物分子的包被面积，同时纳米级颗粒可在液相中保持稳定的悬浮状态，能够借助结合发光原理进行免清洗和均相检测。此外，该种检测技术还应用了链霉亲和素-生物素放大系统，该系统的作用是促使单位体积中的生物分子浓度提高，以实现提高检测物质敏感性，减少试剂用量的目标[5]。 
　　总结光激化学发光法的应用优势主要包括以下几点，（1）均相反应：酶联免疫吸附法和化学发光微粒子免疫分析法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志均为非均相反应，该种反应方法存在的缺点为反应时间长、反应体系温度欠均匀和反应不充分。而光激化学发光法检测过程中的反应过程均为均相反应，与非均相反应相反具有反应时间短、反应体系温度均匀、反应充分等优势，可有效提高检测结果的准确性[6]。（2）可免清洗：由于光激化学发光法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志的均相反应过程中应用了结合发光原理，因此无需进行清洗分离，即可有效避免均相反应过程中的交叉污染和随机误差。（3）使用试剂量少：实践应用发现，光激化学发光法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志时，每个检测指标仅需使用25 μl试剂，在一定程度上提高了小样本检测小型化、芯片化和高通量的可能性[7]。（4）敏感性：光激化学发光法应用了纳米级颗粒，不仅增加了均相反应的表面积，同时还有效提高了检测过程的敏感性，缩短了检测时间[8]。 　　分析光激化学发光法在检测乙型肝炎病毒感染血清学标志抗HBc时存在应用局限性的原因主要为以下几点：（1）光激化学发光法与化学发光微粒子免疫分析法选择HBc原材料和溯源选择存在一定程度的差异；（2）光激化学发光法与化学发光微粒子免疫分析法的检测原理不同，光激化学发光法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志抗HBc的原理为竞争法，化学发光微粒子免疫分析法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志抗HBc的原理为夹心法，当两种检测方法的检测结果出现差异时，检验者可采用第三种检测方法进行验证。笔者所在医院本次研究因检测样本数量有限，未能进行第三方验证。（3）本次研究发现，光激化学发光法乙型肝炎病毒感染血清学标志抗HBc的检出能力不足，还有待进一步提高，但在检测其他乙型肝炎病毒感染血清学标志时符合率很高。 
　　笔者所在医院本次对光激化学发光法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志的性能进行研究发现采用光激化学发光法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe的阳性率与化学发光微粒子免疫分析法比较，差异均无统计学意义（P>0.05），但检测抗HBc的阳性率却明显低于化学发光微粒子免疫分析法（P<0.05）。该研究结果表明虽然光激化学发光法实现了均相、快速、少量试剂、免洗检测，但在应用性能上仍存在一定的不足，需要临床进一步深入研究和改进，以进一步提高临床检验结果的准确性。