实验粗蛋白测定仪对饲料中粗蛋白的测定

　　随着饲料工业的快速发展,饲料产量迅速增长,饲料中蛋白质含量的测定显得日益重要,虽然粗蛋白测定无法鉴别三聚氰胺和尿素等物质,但是在目前条件下,饲料中粗蛋白的测定仍然是评价饲料营养价值的重要指标。饲料中蛋白质的含量是评价其质量高低的主要指标。因此,蛋白质的测定一直是我们国家商品检验中十分重要的项目。

　　几年来,随着经济的发展,一些不法商贩常在食品和饲料中掺假作伪,谋取暴利。所以,如何准确快速测定其中的成分,已成为各监督行业执法的重要依据。饲料中粗蛋白的测定大致分为两种:凯氏定氮法和自动定氮仪法。自动定氮仪法中要用到的粗蛋白测定仪是利用凯氏定氮原理,快速自动地进行蒸馏、滴定和计算。

　　实验用粗蛋白测定仪对饲料中粗蛋白的测定如下：

　　1、实验原理：凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。

　　2、试剂：硫酸、混合催化剂、氢氧化钠、硼酸、混合指示剂、盐酸标准溶液、 蔗糖、硫酸铵、硼酸吸收液。

　　3、仪器设备：粗蛋白测定仪、样品粉碎机或研钵、分样筛、分析天平、消煮炉或电炉、滴定管、凯氏烧瓶、凯氏蒸馏装置、锥形瓶、容量瓶、消煮管。

　　4、试样的选取和制备：选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。

　　5、分析步骤

　　（1）试样的消煮：称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将 凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力 （360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。

　　（2）氨的蒸馏：将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器 的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。

　　（3）蒸馏步骤的检验：精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按（2）步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2％，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。

　　（4）滴定：用（2）或（3）法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。

　　6 、空白测定：称取蔗糖0.5g，代替试样，按第5章进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3mL。

　　7、 分析结果的表述

　　计算见下式：

　　粗蛋白质（％）=（V2-V1）?c×0.0140×6.25/（m×V＇/V） ×100

　　式中：V2── 滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；

　　V1── 滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；

　　c── 盐酸标准溶液浓度，mol/L；

　　m── 试样质量，g；

　　V── 试样分解液总体积，mL；

　　V── 试样分解液蒸馏用体积，mL；

　　0.0140── 与1.00mL盐酸标准溶液〔c（HCl）=1.000mol/L〕相当的、以克表示的氮的质量。

　　6.25── 氮换算成蛋白质的平均系数。

　　重复性

　　每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

　　当粗蛋白质含量在25％以上时，允许相对偏差为1％。

　　当粗蛋白含量在10％～25％之间时，允许相对偏差为2％。

　　当粗蛋白质含量在10％以下时，允许相对偏差为3％。