高效液相色谱的应用

例一、磺胺分析

样  品：磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑和甲氧苄氨嘧啶的混合物

色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，740色谱数据处理机

检测器：UV 481型紫外检测器，波长240nm

色谱柱：μ-Bondapak C₁₈ , 5μm，柱长25 cm，柱径4.6 mm

流动相：由KH₂PO₄（0.05mol/L）和Na₂HPO₄（0.05 mol/L）以及MeOH所组成，其用量比例为200:10:165，

流  速：1mL/min

进  样：10μL

结  果：所有组分在6min之内全部流出，各组分完全分离，组分出峰顺序为：磺胺保留时间为2.60 min, 磺胺嘧啶保留时间为3.18 min、磺胺甲基异噁唑保留时间为4.33 min,甲氧苄氨嘧啶保留时间为5.19min。

例二、银杏内酯分析

样  品：含银杏苦内酯等4种物质的混合物

色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪

        配有570自动进样器，Rheadyane 77251进样阀，HP化学工作站

检测器：500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为91℃，氮气流速为2.75L/min

色谱柱：Platinum OPS，5μm，柱长625px，柱径4.6mm

流动相：水:甲醇:四氢呋喃 = 75:20:10

流  速：1mL/min

进  样：10μL

结  果：所有组分在15min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为银杏苦内酯C, 峰2为白果内酯, 峰3银杏苦内酯A, 峰4为银杏苦内酯B。

例三、脂肪酸甲酯分析

样  品：含5种脂肪酸甲酯的混合物

色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站

检测器：500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为45℃，氮气流速为1.5L/min

色谱柱：Silver Impregnated Ion-Exchange ,柱长625px，柱径4.6mm

流动相：乙腈:甲醇 = 2:98

流  速：0.75mL/min

进  样：10μL

结  果：所有组分在10min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为C_18：0脂肪酸甲酯，峰为C_18：1脂肪酸甲酯，峰3为C_18：2脂肪酸甲酯，峰4为C_18：3脂肪酸甲酯，峰1为C_20：4脂肪酸甲酯。

例四、嘌呤分析

样  品：取1mL血浆加入200μL的1.98mol/L的高氯酸（GR），再加入600μL蒸馏水和200μL的1.47mol/L的别嘌呤醇（内标），用旋转混合器振摇10s于1200g离心10min，取上层清液备分析用。

色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站

检测器：UV紫外检测器，254nm

色谱柱：μBondapsk C₁₈ ，10μm，柱长750px，柱径3.9mm

流动相：0.02mol/L的磷酸二氢钾，pH = 2.2

流  速：2.0mL/min

进  样：10μL

结  果：所有组分在12min之内全部流出，各组分分离完全，保留时间依次为：尿嘌呤为3.18min（峰1），腺嘌呤为3.21 min（峰2），次黄嘌呤为3.90 min（峰3），5-羟基吡嗪酸为4.75min（峰4），5-羟基吡嗪胺为5.31 min（峰5），黄嘌呤为5.90 min（峰6），吡嗪酸为7.35min（峰7），内标别嘌呤醇为8.53min（峰8），吡嗪胺为9.57min（峰9）。

例五、抗菌素分析

样  品：含有红霉素等5种抗菌素的混合物

色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪

        配有570自动进样器，Rheadyane 77251进样阀，HP化学工作站

检测器：2000型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为95℃，氮气流速为2.0L/min

色谱柱：Alltima^TM C₁₈ ,5μm，柱长375px，柱径4.6mm

流动相：A为0.2% 五氟丙酸, B为甲醇

梯  度：时间      0min        5min   

        A/B     55%/45%     35%/65%        

流  速：1mL/ min

进  样：10μL

结  果：所有组分在6min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为红霉素，峰2为链霉素，峰3为托布霉素，峰4为阿米卡星，峰5为新霉素。

例六、无活菌素分析

样  品：含无活菌素等5种物质的混合物

色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪

        配有570自动进样器，Rheadyane 77251进样阀，HP化学工作站

检测器：2000型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器

漂移管温度为96℃，氮气流速为2.9L/min

色谱柱：Alltima^TM C₁₈ ,5μm，柱长625px，柱径4.6mm

流动相：THF:水 = 60:40

流  速：1mL/min

进  样：20μL

结  果：所有组分在20min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为无活菌素，峰2为单活菌素，峰3为二活菌素，峰4为三活菌素，峰5为四活菌素。

例七、植物甾醇分析

样  品：含β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇和胆固醇的混合物

色谱仪：“南京科捷LC600”液相色谱仪，配有色谱工作站

检测器：Alltech 2000型  ELSD蒸发光散射检测器

        漂移管温度为70℃，氮气流速1.6L/min

色谱柱：Supecol Discouery C₁₈ , 5μm，柱长625px ，柱径4.6mm

流动相：甲醇

流  速：1mL/min

进  样：10μL

结  果：所有组分在19min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为菜籽甾醇保留时间13.70min，峰2为胆固醇保留时间14.62 min，峰3为豆甾醇保留时间15.45min，峰4为菜油甾醇保留时间15.97min，峰5为β-谷甾醇保留时间17.05min。