免疫球蛋白标记技术_荧光素标记抗体技术

抗体

FITCPBSDMSO碳酸盐缓冲液

搅拌器紫外分光光度计

1.  将纯化的IgG抗体对PH9～9.5碳酸盐缓冲液透析过夜，透析后抗体液移入小烧杯中

　　　　
2.  称取适量IFTC，加入二甲亚砜（DMSO）（FITC～1 mg/1 ml DMSO），使终浓度为1 mgFITC/1 mlDMSO

　　　　
FITC/IgG比例
如IgG浓度为1 mg/ml，FITC/IgG比例约为50 μgFITC/mgIgG；

如IgG为5～10 mg/ml，则比例为25 μgFITC/ml IgG

在10 ml小烧杯中先放入抗体

3.  按上述比例将FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗体溶液中

4.  将标记物用PBS加至2.5 ml，磁力搅拌器室温下避光搅拌2 h，用PD10柱（Sephadex G25柱）除去游离荧光素，先用25 ml PBS淋洗G25柱。收集PBS洗脱第一个荧光素结合蛋白峰，测定F/P比值。第二个荧光素峰为游离荧光素。

计算：

　　　2.87×A495

F/P＝────────

　　A280-0.35×A495

合适的F/P值为2～4。

1.  FITC保存于4 ℃暗处，使用前待试剂瓶升至室温时开盖称取，以避免潮解。

　　
2.  FITC-DMSO液要临用时配制。

　　
3.  碳酸盐缓冲液要新鲜配制。