1.多聚赖氨酸和多聚鸟氨酸;
多聚赖氨酸和多聚鸟氨酸是两种最常用的促进细胞贴壁生长的大分子。Polylysine或polyornithine均可从各种试剂公司订购,我室常用的是Poly-L-lysine hydrobromide (SigmaP6282),用pH值8.4的硼酸缓冲液或pH值7.4的PBS配成100µg/ml,过滤分装,-20℃保存。包被培养板时,我们一般选用25µg/ml的浓度进行包被,37℃4h或过夜,然后无菌水洗3遍(一定要将未结合的大分子洗去,因为他们都有细胞毒性),超净台中晾干。包被好的培养板和细胞瓶可在4℃保存2-4周,多聚赖氨酸可回收重复使用1-2次。
2.细胞外基质成分(ECMcomponents):
••••••••••••••••••••••••••••••••••••••细胞外基质成分是体内细胞间粘连和接触的最重要的参与物质,细胞外基质成分与细胞表面受体结合不仅调节细胞黏附,还直接调节细胞代谢、分化和基因表达。适用于在神经元培养尤其是外周神经系统神经元的培养。
胶原是动物体内最为丰富的蛋白,Ⅰ型纤维胶原很早就用于神经系统的组织培养,现在在外周神经系统的神经元和神经系统细胞系的培养中依然很常用 。Ⅰ型纤维胶原可以自己从鼠尾提取,现在也有很多商品化的产品可以购买 。 胶原包被时只需用很少最的溶液覆盖培养基质,放置于超净台中让水分自然挥发,自然凝固即可 。
纤连蛋白和层黏连蛋白是胶原之后另两种被用于神经细胞体外培养的两种细胞外基质成分 。 不同类型细胞对两种蛋白的敏感度不同,神经元大都在层黏连蛋白包被的基质上生长得更好 。 包被浓度为 10µg/ml 的层黏连蛋白 (Sigma L2020) 和 20µ,g/ml 的纤连蛋白 (Sigma F0635) 。
3. 神经干细胞的贴壁生长
神经干细胞 一般呈球形悬浮生长,如要贴壁培养,可预先采用 0 . 001 %多聚鸟氨酸和 0. 2% 明胶包被新的培养瓶,鸟氨酸包被过夜,明胶包被 4 -5h, 用时将明胶吸出,将神经球加进去,第 2天就可以观察到成球生长的神经于细胞已经单层生长 。 展开 |