在复合培养基如YPAD中,当接种足量的细胞并于30℃培养过夜(16小时),使其分裂10代,大多数酵母菌株滴度可达2 x 108到3 x 108个细胞/ml; 而在合成培养基如SC减样选择培养基中,细胞滴度为1 x 107到2 x 107个细胞/ml。可以用几种方法来检测培养物的滴度,如测定600nm处的光密度(OD600),或用血细胞计数器和显微镜进行细胞计数。对大多数菌株来说, OD600为0.1相当于细胞滴度为1x106个细胞/ml。用血细胞计数器检测细胞密度比较费时间,但可以直接观察酵母细胞,这样可以识别健康与污染的培养物。 一、分光光度测定法
1. YPAD 过夜培养物用水 100 倍稀释,而 SC 减样选择培养基过夜培养物 10 倍稀释。
2. 用分光光度计测定 600 nm 处的光密度。
3. 记住稀释倍数,计算原始培养物的细胞数。
二、血细胞计数器计数法
在任何种类固体培养基上的酵母菌落可以被影印培养到其他种类的培养基中,以便进行特定表型的筛选或鉴定。有代表性的做法是用一个自制的复制器具进行,它由一个直径77mm的木头或金属圆柱体和一个配上去稍大的内径80mm的金属环构成。将一块15cmx15cm见方的棉制天鶴滅在圆柱体上展平,并用金属环固定,以作为复制介质。一平方米天鹤绒可制成大约36块,洗涤后置于平面上于室温干燥,用棉絮辊去掉棉絮,绒面向下放入灭菌盘或其他合适的容器中,高压灭菌。
1. YPAD 过夜培养物用水 100 倍稀释,SC 减样选择培养基过夜培养物不进行稀释而直接计数。
2. 将细胞悬液小心地加在盖片和血细胞计数器之间。
3. 计数 5 个对角方格中的细胞数量,乘以 5 即是整个网格区细胞的总数。
4. 计算细胞滴度:计数的细胞数 X 5 X 稀释倍数 X 1/血细胞计数器 25 个方格的容积。 展开 |