1. 制备用于同透化的细胞
(1) 对于在盖玻片上生长的细胞
① 将在标准条件下培养的细胞或从组织采集的原代细胞铺在置于 6 孔培养板中的 18x18 mmol/L 的盖玻片上，生长过夜。
② 实验前 2~4 小时，换新培养液，重新放回培养箱中。
③ 吸出培养基，用转运缓冲液清洗细胞两次。
④ 将细胞转入含有转运缓冲液和 40~50 μg/ml 的毛地黄皂苷的 Coplin 缸或载玻片容器中，或者用 2 ml 含毛地黄皂苷的转运缓冲液换掉 6 孔培养板中的缓冲液。孵育 5 分钟。
(2) 悬浮培养的细胞
① 培养细胞至半对数生长期，500 g 离心 5 分钟收集细胞。
② 用转运缓冲液 500 g 离心 5 分钟清洗细胞两次。
③ 用含 40~50 μg/ml 毛地黄皂苷的转运缓冲液重悬浮细胞，浓度为 5x105 细胞/ml 孵育 5 分钟。
2. 去掉毛地黄皂苷溶液，换上新鲜的转运缓冲液。
3. 通过细胞排阻台盼蓝情况监测通透化程度。 展开 | 