培养巨噬细胞可用各种方法和各种来源获取细胞,其中以小鼠腹腔取材法最为实用。人的材料除来源不同外,培养方法大同小异。
1. 实验前三天,向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1 ml(勿注入肠内); 2. 引颈杀死动物;手提鼠尾将全鼠浸入70 %酒精中3~5 秒;
3. 置动物于解剖台上,用针头固定四肢,双手持镊撕开皮肤拉向两侧,暴露出腹膜,但勿伤及腹膜壁;
4. 再用70 %酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10 ml Eagle液注入腹腔中,同时从两侧用手指揉压腹膜壁,令液体在腹腔内充分流动;
5. 用针头轻轻挑起腹壁,使动物体微倾向一侧,使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内;
6. 小心拔出针头,把液体注入离心管中,250 g(4 ℃)离心10 分钟后,去上清,加10 ml Eagle培养基;
7. 计数细胞,每只小鼠可产生20~30×106 细胞,其中90 %为巨噬细胞;
8. 为获取3×105 个贴附细胞/平方厘米,需接种2.5×106 /ml;
9. 为纯化培养细胞,去除其它白细胞,接种数小时后,去除培养液,用Eagle液冲洗1~2 次后,再加新Eagle培养液置37 ℃CO2温箱中培养。 展开 |