1. 琼脂铺底的培养瓶
30 ml无菌培养瓶,每瓶中加5 ml 2 %琼脂培养基,冷却,形成平坦底层后备用; 2. 取生长状态良好已联接成片的细胞,用弯头吸管伸入瓶内,把细胞层纵横割划成若干小区后,倒出培养液;
3. 加入0.25 %的胰蛋白酶液,在倒置显微镜下边消化边观察,当细胞小区边缘微卷起后便立即终止消化,倒出消化液,用Hanks轻轻漂洗一次(不洗亦可),加入新培养液3~5 ml,用吸管把已松动的细胞片吸打下来;分装入1~3 个含2 %琼脂培养基底层的培养瓶中,置温箱继续培养,数日后便可生长成细胞球体;
4. 换液
培养1~2 日后,如需换液,微倾斜培养瓶,令培养液集于培养瓶底角,停片刻,待球体细胞下沉后,吸除部分培养液,再补充新培养液。 展开 |