一、取材
培养正常乳腺可从乳腺切除组织或乳腺成形术组织取材。预先把无菌容器送交手术室(最好含有培养液),委托术者选脂肪少、腺组织多的部位,切取少许,送培养室立即进行培养。获取组织后,应先剥除脂肪组织;培养正常乳腺组织宜用胶原酶消化法。培养乳腺癌组织可采用两种方法。 二、培养程序
1. 直接培养法
适于培养含纤维少的软组织,其主要过程是
(1)在含有少量培养液或Hanks液的容器中,用锋利刀片将组织反复切割成碎块(或用剪刀剪切)。
(2)把组织碎块连同液体注入离心管中,再补加少许培养液,用吸管吹打片刻,置试管架中3~5 分钟。
(3)此时乳腺细胞团或单个细胞大多沉降至管底,而脂肪或其它含纤维多的碎块悬于液体上部;吸除上层液可排除非腺细胞成分,如此可重复2~3 次。
(4)末次处理结束后,向沉降管中再补加培养液,用吸管稍吹打,使沉降物重悬。
(5)不待细胞团块下降立即通过3~4 层无菌沙布滤入另管中。调整好适宜密度,接种入培养瓶中培养。
2. 胶原酶消化法
适于处理含纤维多的较硬组织,其过程与培养其它组织相同。 展开 |