人骨髓间充质干细胞的原代取材

实验概要

人骨髓间充质干细胞的原代取材

主要试剂

75%酒精、含2% SP（Pen Strep）的DPBS、间充质干细胞培养液

主要设备

眼科剪、眼科镊、手术剪、手术镊、5 mL注射器、10 mL注射器、7号针头、400目细胞筛、15 mL离心管、3.5 cm培养皿

实验步骤

人骨髓间充质干细胞取材，需在手术前与患者签署知情同意书。
  用DPBS按2:1稀释临床手术中获得的骨髓，混匀。

1. 400目细胞筛，制成单细胞悬液。
   

2. 将所得的细胞悬液移入50 mL离心管中，室温1 500 r/min离心10 min，弃掉上清液。
   

3. 用间充质干细胞培养液重悬细胞，按每10 cm培养皿1×10⁷个细胞的密度接种，标记为原代细胞（P₀）。
   

4. 置于37℃、5% CO2、饱和湿度的培养箱中静置培养。
   

5. 24h后首次更换新鲜的间充质干细胞培养液，去除未贴壁细胞。以后每2～3天更换1次培养液。
   

       6.待细胞长至80%～90%融合时传代。