力强对大鼠牙周组织中PGE2蛋白表达变化的影响

实验概要

检测力在正常及增强状态下，大鼠牙周细胞PGE2的动态表达，初探PGE2在牙周组织改建中的分子机理。方法采用HE染色和免疫组化的方法，观察牙周形态变化以及牙周组织中PGE2蛋白表达。

实验步骤

1. 动物模型
选用80只250g±20成年雄性Wistar大鼠，随机等量地分为实验组和对照组（正常力）。实验组拔除左侧上颌（B区）所有磨牙。这样，实验组动物的D区磨牙因丧失对颌牙导致力丧失，而C区磨牙功能代偿性增强则构成力增强的动物模型。两组动物分别在实验后6小时、1天、2天、3天、1周、2周、3周和4周各处死5只，共16组。
2. 组织标本制备
实验动物采用4％多聚甲醛心内灌注的方式行内固定。取出下颌相应骨段，保留磨牙区，置于4％多聚甲醛中巩固固定6小时。将标本移至EDTA中脱钙2周。梯度乙醇脱水，石蜡包埋。标本厚5μm，裱于经硅化处理的玻片上。
3. 方法
   1) 组织形态学取相应切片进行苏木素一伊红（HE）染色，在光学显微镜下观察牙周形态变化，并用显微标尺对牙周膜宽度进行测量。
   2) 组化PGE2单克隆抗体，ABC试剂盒（美国Vector公司）。常规免疫组化染色，DAB显色。设已知有PGE2表达的应激大鼠脾组织作阳性对照，以封闭血清代替一抗作阴性对照。
   3) 图像分析与统计学处理
采用MIAS-2000型图像分析仪，对实验组和对照组各时间点牙周膜染色强度进行测量。每个标本均选第一磨牙根为观察对象。结果用t检验进行统计学分析。