◇水解乳蛋白
水解乳蛋白为淡黄色粉末，虽易潮解结块，但不影响使用。
不同批号和牌号质量有差异。水解乳蛋白是乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解后的产物，含有丰富的氨基酸。开始时它是专为猴肾细胞培养设计的，而实际上它对许多细胞系(株)，如Hela细胞和原代细胞都是一种优良培养基。使用时用Hanks液配制成0．5％溶液(酸性)，一般与合成培养基按1：1比例混合使用。
◇鼠尾胶原
胶原是细胞生长的良好基质，它能促进组织和细胞的附着，改善生长表面特性。胶原来源有大鼠尾腱、豚鼠真皮、牛的真皮和牛眼的水晶体等，实验室常用大鼠尾制胶原。鼠尾胶原为粘度较大的半透明液体，难以滤过除菌，应无菌操作制备胶原。
鼠尾胶原的制备方法
①0．1％醋酸溶液，10磅10分钟高压灭菌备用。
②250克体重大白鼠尾一条，置75％酒精中浸泡1小时。
③鼠尾置平皿中切成1．5厘米左右的小段，剥去毛皮，抽出尾腱。
④剪碎尾腱浸泡在150毫升醋酸液中，置于4℃冰箱内，间断振摇48小时。
⑤4000转/分离心30分钟(最好在4℃条件)。
⑥上清液分装小瓶，－20℃保存。
⑦残渣可再加40毫升醋酸液作用24小时后，离心收集保存。
鼠尾胶原使用方法
①将鼠尾胶原均匀涂于器皿的细胞生长面，胶原量以不留液滴为度。
②培养瓶用沾有氨水的消毒棉球封口后置灭菌饭盒内。
③室温2小时，氨气与鼠尾胶原作用，胶原凝固。
④用BSS液或基础营养液洗涤胶原面后，再经细胞培养液浸泡过夜，37℃干燥备用。
◇胚胎浸液
胚胎浸液能促进细胞生长繁殖。常用鸡胚和牛胚浸液。将9—11天胎龄的鸡胚磨碎，加等量缓冲液，离心收集上清液，即为鸡胚浸液，于－20℃—－70℃保存。
合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基，如TC199、MEM、RPMI-1640、DMEM、Ham'sF12等。这些培养基设计时各有其特定的目的，但实际上适用于多种细胞的培养。合成培养基主要成分是氨基酸、 维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。
◇合成培养基的主要成分
氨基酸
氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类细胞对氨基酸需求不同，体外培养的细胞必须依赖培养液供给12种必需L型氨基酸(精氨酸、组氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸和赖氨酸)。此外，用于培养上皮细胞、内皮细胞、神经细胞等的培养液中还需补加谷氨酰胺。这是因为谷氨酰胺除了作为氮源、碳源外，还能促进各种氨基酸进入细胞，它所含的氮既是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，也是合成三、二和一磷酸腺苷的所需物质。实验又证实，谷氨酰胺在培养液中不稳定，加有谷氨酰胺的培养液，半衰期在4℃时为3周，在36．5℃时为1周，因此使用两周以上的培养液还需补加原量的谷氨酰胺。
碳水化合物
碳水化合物既是细胞的能量来源，也是合成某些氨基酸的原料，主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸钠等。
无机离子
无机离子是细胞的重要成分，它们在调节细胞代谢、促进细胞生长发育和维持细胞生理功能等方面有重要作用。
它们还是某些维生素、激素、酶形成过程中不可缺少的原料。培养液中除平衡盐溶液所含无机离子外，有的还含有如Fe2＋、Ze2＋、Cu2＋等离子。
维生素
维生素是维持细胞生长的一种有机化合物，它分为脂溶性维生素和水溶性维生素两大类。脂溶性维生素有维生素A、D、E、K等；水溶性维生素有维生素C和维生素B1、B2、B6、B12等。
其它成分
较为复杂的培养液中还包括核酸降解物如嘌呤、嘧啶、辅酶A以及氧化还原剂如抗坏血酸、谷胱甘肽等等。
◇合成培养基(液)的配制方法
人工合成培养基是细胞培养基的基础培养液，称为基础培养基，因它提供细胞生存所需的营养成分，还称为细胞营养液。人工合成培养基有干粉型、1倍工作液型和10倍浓缩型。常用的干粉型培养基性质稳定，便于储存和运输，使用方便。使用时按照说明书要求配制，要确保营养液所有组分完全溶解，并在消毒和保存过程中不产生沉淀。
RPMI-1640基础培养液
甲液：RPMI-1640 10．4克
Hepes 2．7～5．4克
三蒸水 700毫升
磁力搅拌至颗粒完全溶解(3～4小时，橙黄色)
乙液：NaHCO3 2．0—2．2克
三蒸水 30毫升
37℃，30分钟颗粒溶解
将甲、乙两液混合，加水至终体积1000毫升，在4℃静止2～3小时。滤过除菌，分装，抽样做无菌试验，－20℃冻存。
RPMI—1640血清细胞培养液
RPMI-1640基础营养液 80毫升
灭活小牛血清 20毫升
青霉素、链霉素 各100单位/毫升
pH 7．1—7．2
◇配制合成培养基(液)注意事项
①用三天内制备的玻璃三蒸水配制培养液。
②按二周用量配制为宜，配量过多，存放时间过长会造成培养基老化、变质、产生沉淀。
③培养液中各成分是否完全溶解的判断方法：将培养液置室温或4℃冰箱30分钟后，观察瓶底有无颗粒产生。
④根据实验需要，在培养液中加入适量37℃单独溶解的NaHCO3溶液。正常体细胞培养液中NaCO3量为2．0—2．2克/升，肿瘤细胞为1．5—1．7克/升。
⑤干粉培养基不易溶于水，若用CO2加压滤过或CO2冲击助溶方法，因CO2用量不易掌握，常出现CO2用量过多使营养液pH值明显降低的情况，若再用NaHCO3调节pH值时，因NaHCO3的用量也难以掌握，常造成Na＋浓度过高，从而影响细胞的生长繁殖。本实验室采用空气CO2助溶法，即将甲液在磁场上搅拌3—4小时，当甲液pH值下降到5．8左右时(橙黄色)，氨基酸和维生素基本溶解。在甲液内再加入溶解有NaHCO3的乙液，两液混和后，营养液pH值为7．0—7．1。抽滤后pH值上升0．1。此法操作简便，营养液pH值稳定。
人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基，常用的是血清、谷氨酰胺等。另外，为防止污染，培养液中还要添加一定量的抗菌素。基础培养基加血清、谷氨酰胺、抗菌素等物质后，叫细胞培养基，也叫完全培养基。细胞培养基按血清含量多少又分为两种，即细胞生长培养基和细胞维持培养基。
血清中究竟哪些成分是细胞生长所必需的呢?几十年来没有明确答案。还有一些细胞在血清培养基中不能生长。另外，由于血清成分复杂，常常给细胞培养后的研究工作，如细胞产物的提取、激素和药物作用机理的研究带来困难。1975年，Sato成功地用无血清培养基培养了垂体细胞株CH4，还有人用HamF12无血清细胞培养基成功地克隆了CHO细胞。近20多年来已报道了几十种细胞系(株)在无血清细胞培养基中成功地生长和增殖，这些细胞有内分泌细胞、表皮细胞、神经细胞、淋巴细胞、成纤维细胞和肾细胞等。无血清细胞培养基的使用保证了实验结果的准确性、可重复性和稳定性，减少细胞污染，简化了提纯和鉴定 McAb、淋巴因子、干扰素等细胞产物的程序，降低疫苗反应。
无血清培养基一般由基础培养基和替代血清的补充成分组成。
◇基础培养基
必须根据不同的培养细胞选用合适的基础培养基。常用的基础培养基有MEM、NT、M199、F12、DMEM、RPMI—1640、IMDM、DMEM：F12＝1：1、RPMI—1640：DMEM：F12=2：1：1等，其中DMEM和F12混合培养液为多种细胞使用，根据不同细胞的要求，每升中补加Hepes 15毫摩尔，NaHCO31．2—2．4克。
◇无血清培养基的补充成分
补充成分即代替血清的各种因子的总称。多数无血清培养液必须补加3～8种因子，任何单一因子不能取代血清，至少需两种。已知有100多种此类因子，其中有些是必需补充因子，如胰岛素、硒酸钠(Na2SeO3)和转铁蛋白，其它多数为辅助作用因子。补充成分按功能将其分成四类。
激素和生长因子
很多细胞用无血清培养时需加入激素，如胰岛素(Ins)、生长激素、胰高血糖素等。此外，甾体激素如孕酮、氢化可的松、雌二醇等也是无血清细胞培养时常用的补充因子。几乎所有的细胞系都需要Ins，它是一种多肽，能与细胞亡的Ins受体结合形成复合物，调节和控制细胞内多种代谢途径，加强糖原、蛋白质、甘油三酯和DNA的合成。其原因可能是Ins中混杂某些刺激细胞生长的物质和重要的微量元素，但也有细胞不加胰岛素也能生长。前列腺素E1和E2能刺激细胞生长，增加细胞环磷腺苷的水平。有些激素能调节细胞内某种生化反应，如腐胺能促进细胞(B104)快速分裂，是因为激素能增加细胞内腐胺的合成或促进腐胺转入细胞内。生长因子是维持细胞生存和增殖所必需的物质，依照化学性质可分为多肽生长因子和甾体生长因子。多肽生长因子相对分子质量在10000左右，目前已鉴定的有数十种，其中半数以上是近几年发现和鉴定的。脊椎动物至少有30种细胞类型(神经、肝、肾、支气管等)，每种细胞至少有2—3种生长因子对其正常生存和增殖起着调节作用，因此估计机体中约有100多种生长因子。按结构和功能可分为表皮生长因子(EGF)、神经生长因子(NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)等。生长因子是有效的促有丝分裂原，能缩短细胞倍增时间。
结合蛋白
结合蛋白有两种，一种是转铁蛋白(TF)，它能增强细胞摄取和利用培养液中铁的能力，还可结合毒性金属离子，不同细胞需要量不同。有人认为TF中混杂有激素，也足以刺激细胞生长。白蛋白是另一种结合蛋白，它与脂类、金属离子、激素等结合后，具有刺激细胞增殖作用。
贴壁因子
绝大多数真核细胞在体外生长时需要固着于适当的基底，帮助细胞固着贴附的物质叫贴壁因子或胞外基质。体外培养细胞常于粘着斑(adhension plaque)或其近旁发现纤维粘连蛋白(fibronectin，FN)，此处质膜下正是纽带蛋白(vinculin)及α－辅助肌动蛋白(α-actin)存在部位。肌动蛋白丝借助这两种蛋白质附着于质膜的内表面。FN又与非胶原糖蛋白相连。膜上FN受体将细胞外基质FN与细胞内肌动蛋白丝相连。这样，胞外基质、细胞膜受体及细胞内某些分子直接或间接作用，共同形成细胞结构和功能的统一体，成为控制细胞形态、功能、生长、分化以及某些其它性质(如影响质膜中蛋白质的组织等)的重要因素之一。如体外培养的神经元存活及分化主要决定于所提供的细胞外基质；肌细胞分化，肝细胞和乳腺细胞的形态、代谢，肿瘤细胞的转移过程，都与细胞外基质有关。
常用贴壁因子储存液的配制方法：
纤维连结素 以1摩尔/升的尿素PBS液配制成1毫克/毫升的母液，－20℃保存。
多聚赖氨酸(poly-D-lysine)相对分子质量300000，贮存浓度为1毫克/毫升(用D-Hanks液或PBS液配制)。4℃冰箱保存，不能冻存。
胶原(collagens) 贮存浓度为1—3毫克/毫升，溶解在PBS液或0．1摩尔/升的盐酸或0．1摩尔/升的醋酸液中。
