糖尿病及其并发症的实验室检测及方法学评价

（一）体液葡萄糖的检测

    酶法为推荐使用的测定方法（如：己糖激酶法或葡萄糖氧化酶法）。

    1. 标本收集和贮存   

    大多数临床实验室采用血浆或血清测葡萄糖浓度，而大多数床旁测定葡萄糖的方法使用的是全血。使用不同的标本应采用不同的参考值。

    室温下，血细胞中进行的糖酵解使血中葡萄糖减少，在获得标本后应尽快测定。

    通过向标本中加碘乙酸钠或氟化钠可抑制糖酵解作用，使血葡萄糖在室温下稳定3天。

    2. 已糖激酶法   

    （1）原理：在有已糖激酶(hexokinase)和Mg2+存在下，葡萄糖被ATP磷酸化为6-磷酸葡萄糖。在NADP+参与下，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶将6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸，同时NADP+转变为NADPH+H+。NADPH生成量与标本中葡萄糖含量成正比，可以在340 nm波长监测NADPH吸光度变化，定量葡萄糖。用从酵母中获得的G-6-PD，需NADP+作为辅因子。如使用细菌来源的G-6-PD，则以NAD+作为辅因子，NADH的生成量也在340nm测定。

    （2）评价：该法准确度和精密度高，特异性高于葡萄糖氧化酶法，适用于自动化分析，为葡萄糖测定的参考方法。轻度溶血、脂血、黄疸、氟化钠、肝素、EDTA和草酸盐等不干扰本法测定。

    3. 葡萄糖氧化酶法

    （1）原理：葡萄糖氧化酶（glucose oxidase, GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸和过氧化氢（H2O2），再加入过氧化物酶和色原性氧受体（如联大茴香胺，4-氨基安替比林偶联酚），生成有色化合物，比色定量。

    （2）评价：GOD高特异性催化β-D-葡萄糖。而葡萄糖α和β构型各占36%和64%。要使葡萄糖完全反应，必须使α-葡萄糖变旋为β-构型。某些商品试剂中含有变旋酶，可加速变旋过程。也可延长孵育时间，通过自发性变旋来转化。过氧化物酶的特异性远低于GOD。尿酸、维生素C、胆红素、血红蛋白，四环素和谷胱甘肽等可抑制呈色反应（通过与H2O2竞争色素原受体），用Somogyi过滤可以除去大部分干扰物质。

    4. 尿葡萄糖测定   

    尿糖检测快速、廉价和无创伤性，适用于大规模样本的筛选。

（二）酮体的检测

    酮体（ketone  bodies）由乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮组成。最主要的来源为游离脂肪酸在肝脏的氧化代谢产物。

    由于尿酮体检测的方便性，已广泛用于1型糖尿病的病情监测。

    尿酮体测定：Acetest和Ketostix法都适于对尿酮体的测定。其特异性和灵敏度与测定血清时相同。

（三）乳酸和丙酮酸的检测

（四）糖化蛋白的检测

    糖基化是指通过非酶促作用将糖基加到蛋白质的氨基酸基团上。测定糖化蛋白（glycated  protein）可为较长时间段的血糖浓度提供回顾性评估，而不受短期血糖浓度波动的影响。

    1. 糖化血红蛋白   

    糖化Hb的形成是不可逆的，其浓度与红细胞寿命（平均120天）和该时期内血糖的平均浓度有关，不受每天葡萄糖波动的影响，也不受运动或食物的影响，所以糖化Hb反映的是过去6~8周的平均血糖浓度，这可为评估血糖的控制情况提供可靠的实验室指标。

    糖化Hb的测定方法的原理有多种：①根据电荷差异：离子交换层析，高效液相层析（HPLC），电泳和等电聚焦电泳：②根据结构差异：亲和层析和免疫测定法；③化学分析：比色法、分光光度法。

    2．果糖胺   

    除了血红蛋白，葡萄糖也可通过非酶促糖基化反应与其他蛋白（如清蛋白，膜蛋白，晶状体）结合形成酮胺（ketoamine）。由于清蛋白的产生比血红蛋白快（清蛋白半寿期约为20天），所以糖化清蛋白的浓度反映的是近2~3周血糖的情况，

    3．糖化终末产物

（五）尿清蛋白排泄试验

    糖尿病患者有很高的肾脏损害风险。大约1/3的1型糖尿病者最终发展为慢性肾衰。常规检查发现尿清蛋白排泄（urinary albumin excretion, UAE）的增加，持续性尿蛋白定性阳性（相当于尿清蛋白排泄率≥200μg/min），提示已有明显的糖尿病性肾病。

（六）胰岛素与胰岛素抗体的检测

    1．胰岛素测定 

    2. 胰岛素抗体  

    胰岛素抗体检测方法均为免疫学方法，如RIA、免疫亲和层析法等。

（七）胰岛素原的检测

（八）C-肽的检测

    测定C肽比胰岛素有更多优点。因为肝脏的代谢可以忽略，所以与外周血胰岛素浓度相比，C肽浓度水平可更好地反映β细胞功能。C肽不受外源性胰岛素干扰且不与胰岛素抗体反应。

（九）胰高血糖素的检测