Cloning of PCR products
Stocks:
LB Agar: Luria Broth after Lennox:
per Liter
Tryptone | 10 g |
Yeast Extract | 5 g |
Sodium Chloride | 5 g |
Bact. Agar | 15 g |
pH 7.0
Autoclave and store sterile at room temperature
Stock solutions:
Store all frozen in aliquots at -20C (can be stored in dark at 4C but -20 is usually as simple!)
X-Gal: 20 mg/ml in Dimethylformamide (DMF)
IPTG: 100 mM
Ampicillin: 100 ug/ml (micrograms)
(see also page on BAC isolation with BACs including chloramphenicol resistance.)
Filter sterilize
X-Gal is 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-galactoside. It is hydolysed by. beta galactosidase to form an indigo-type blue-green precipitate. Bacteria with the B-galactosidase gene give blue colonies.
IPTC is isopropylthio-beta-D-galactoside. It is a false substrate (not cleaved) and inducer of beta-galactosidase
Ampicillin is an antibiotic which requires the resistance plasmid in the bacteria
Final concentrations on plates
X-gal of 80ug/ml (1:250 dilution of the stock solution, can use half this)
IPTG 0.05 mM /L (1:200 dilution of stock, can use twice this)
so to 100 ml LB agar (molten but < 50C, ie you can hold the bottle in your hand without burning), add 100 ul Ampicillin stock, 400 ul X-Gal stock and 500 ul IPTG stock
Use 20 ml per Petri dish (cover bottom then move once side-to-side to distribute).
万物蓬勃的7月里迎来了2022年ANTOP奖的申报和评审工作。由岛津企业管理(中国)有限公司申报的“3CoinONE全新体验气袋进样器”ANTOP奖进入专家评审阶段。奖项名称:3CoinONE全新体验......
青岛青源峰达太赫兹科技有限公司研发团队在国际顶级期刊《TrendsinBiotechnology》(译名:《生物技术趋势》)在线发表题为“THzmedicalimaging:frominvitroto......
蛋白质作为构成人体组织器官的支架和主要物质,在人体生命活动中起着重要作用。蛋白质的相互作用能产生许多效应,如形成特异底物作用通道、生成新的结合位点、失活、作用底物专一性和动力学变化等,细胞的代谢、信号......
2021年9月9日,无锡臻和生物科技有限公司(以下简称“臻和科技”)与美国VyantBio公司签署TissueofOrigin®(以下简称“TOO®”)全球权益和ZL转让协议,全资收购这款唯一获FDA......
2021年7月20日,JournalofCellularPhysiology及JournalofCellularBiochemistry同时撤回了中国学者49篇文章。从2019年开始,Journalo......
安进宣布,美国FDA授予其在研firstinclass单抗bemarituzumab突破性疗法认定,与改良FOLFOX6化疗方案(亚叶酸钙、氟尿嘧啶和奥沙利铂)联用,一线治疗FGFR2b过表达和HER......
2007年,中国科学院金属研究所研究员张志东在英国《哲学杂志》(PhilosophicalMagazine)上发表论文,提出两个猜想,并在猜想基础上推定出三维伊辛模型的精确解。被《哲学杂志》审稿人评价......
磷酸甘油酸突变酶1(PGAM1)通过其代谢活性以及与其他蛋白质(例如α平滑肌肌动蛋白(ACTA2))的相互作用,在癌症代谢和肿瘤进展中起关键作用。变构调节被认为是发现针对PGAM1的高选择性和有效抑制......
2018年12月6日,来自圣迭戈的消息——Illumina公司(纳斯达克股票代码:ILMN)今天宣布推出新型高密度基因分型芯片Infinium™GlobalDiversityArray。这款芯片设计源......
分析测试百科网讯2016年5月27日,牛津仪器就AgarScientific品牌的电镜耗材配件、实验室耗材和实验室设备与安特百货达成战略合作协议,实现长期共赢互利。牛津仪器全权代理AgarScient......