陈子江团队人源分裂期胚胎介导高效的单碱基编辑！

　　基础编辑器能够在不引起双链断裂的情况下实现单核苷酸转换，目前已成功应用于小鼠和人类胚胎的基础校正。与小鼠相比，人类胚胎中的碱基编辑效率通常较低（低于30％），这常常导致镶嵌现象，而且还限制了当前基础编辑方法在人类胚胎中进行基因功能研究的应用。2019年5月2日，杨辉、陈子江团队等人在Genome Biology杂志发表题为“Human cleaving embryosenable robust homozygotic nucleotide substitutions by base editors”的文章，该文章提出了人源分裂期胚胎实现了高效的单碱基编辑。

　　另外，2019年3月14号，山东大学齐鲁医学院陈子江团队再次在国际顶级医学期刊《新英格兰医学杂志》（NEJM，IF=79）上发表题为BRCA2 in Ovarian Development and Function的文章。该研究在中国患者身上发现肿瘤易感基因BRCA2突变导致卵巢早衰的新证据（点击阅读）。

　　2019年2月28日，山东大学陈子江团队在国际顶级医学期刊Lancet（IF=53）在线发表题为“Frozen versus fresh single blastocyst transfer in ovulatory women: a multicentre, randomised controlled trial”的临床研究论文，该论文的实验组与对照组每组都分配825名妇女，并纳入分析。冷冻单囊胚转移导致单胎活产率高于新鲜单囊胚转移。中度或重度卵巢过度刺激综合征的风险，妊娠丢失，其他产科并发症和新生儿发病率在两组之间相似。冷冻单囊胚转移与先兆子痫风险较高相关。总而言之，单个冷冻胚泡移植的单胎分娩率高于排卵期妇女新鲜单个胚泡移植，而且预后良好。冷冻胚泡移植后，先兆子痫风险增加值得进一步研究。这是山东大学首次以第一通讯单位在国际顶级医学期刊柳叶刀（IF=53）发表研究型论文（点击阅读）。

　　与此同时，在近段时间，山东大学陈子江等人在国际顶级医学期刊新英格兰医学杂志发表2篇文章，分别是"Transfer of Fresh versus Frozen Embryos in Ovulatory Women"及“Fresh versus Frozen Embryos for Infertility in the Polycystic Ovary Syndrome”的研究论文，这两篇文章系统的阐述了新鲜胚胎与冷冻胚胎与多囊卵巢综合征导致的不孕之间的内在联系。该研究证明，新生胚胎移植和不孕不育患者之间的胚胎移植和冷冻胚胎移植之间的活胎率没有显着差异，但冷冻胚胎移植导致卵巢过度刺激综合征的风险较低同时，在多囊卵巢综合征的不孕妇女中，冷冻胚胎移植与活产率较高相关，卵巢过度刺激综合征的风险较低，首次转移后先兆子痫的风险高于新鲜胚胎移植（点击阅读）。

　　1、人源分裂期胚胎介导高效的碱基编辑

　　碱基编辑在特定基因位点安装精确的核苷酸变化，而不会导致双链断裂。 它在人类胚胎中的效率通常较低，限制了其在功能遗传研究中的效用。在这里，陈子江等人将基础编辑注入人源分裂期双细胞和四细胞胚胎中，结果发现会得到比MII卵母细胞或受精卵高得多（高达13倍）的纯合子核苷酸取代效率。

　　为了测试人胚胎中的碱基编辑系统，研究人员首先将BE3mRNA和sgRNA注射到单细胞胚胎（受精卵阶段）以诱导G>A转化。 在受精后约24小时（单细胞阶段）将BE3 mRNA和sgRNA共注射到3PN受精卵的细胞质中。 将注射的受精卵培养至8细胞阶段并用于靶向深度测序分析。 虽然在所有注射胚胎（n = 6）的一些卵裂球中观察到HBb基因座中预期的Trp16至停止转化（g.97G> A或g.98G> A），但碱基编辑频率相对较低。

　　总之，陈等人发现将基础编辑递送到裂解双细胞或四细胞人类胚胎中会导致更高的纯合子核苷酸转化率，这可能是由于人类受精卵中的染色质更紧密以及受精卵裂解阶段周围的大量RNA降解事件。最近的一项研究报告通过碱基编辑校正了胚胎中的马凡综合征（MFS）致病突变。

　　然而，由于胚胎数量少和实验设计和数据分析不充分，结论依旧是站不住脚的。我们的研究中没有发现任何两个单独胚胎之间的重叠突变，并且极少数位于外显子上，不太可能影响人类胚胎发育过程中基因功能研究的基础编辑应用。当然，迫切需要探索和使用高效率和高保真度的基础编辑器，以便将来在人类胚胎中进行基因操作。

　　2.BRCA 2在卵巢发育和功能中的作用

　　早发性卵巢功能不全是常见的生殖内分泌疾病之一，在育龄期女性中的发病率约为1%~5%。目前我们对其发病原因仍未完全了解。近些年，随着基因组学技术的发展，人们陆续发现一些DNA损伤修复及减数分裂相关基因与卵巢发育有关。然而，卵巢发育和维持的许多关键基因仍然未知。

　　在这里，研究人员通过全外显子组测序技术，分别在一对患有早发性卵巢功能不全（premature ovarian insufficiency，POI）的姐妹及一位散发POI患者中发现了新的BRCA2复合杂合突变（图A），分别为c.68-1G>C和c.4440T>G(p.Y1480X)以及c.8168A>T(p.D2737V)和c.9697-9700del(p.C3233Wfs*15)。

　　该研究中的女性患者均为原发性闭经，并且这些女性及其亲属均未发现血液学异常或实体瘤。这些发现为BRCA2在卵巢功能维持中的重要作用提供了进一步的证据。研究进一步揭示了由致病性突变引起的BRCA2剂量不足可导致孤立性卵巢功能障碍。

　　原文链接：

　　https://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMc1813800

　　3.单个冷冻胚泡移植的单胎分娩率高于排卵期妇女新鲜单个胚泡移植，而且预后良好

　　研究表明，选择性单胚胎移植（eSET）是降低体外受精（IVF）后母亲和儿童多胎妊娠风险及其相关风险的最有效方法。尽管大力倡导其普遍采用，但由于担心在减少转移的胚胎数量后怀孕率降低，因此其广泛的应用受到限制。已经做了许多努力来改善可能植入的单个胚胎的选择，从而提高eSET后的怀孕率。

　　胚胎培养从卵裂期延伸至胚泡可以更好地评估胚胎的植入潜力。胚泡移植后的植入率高于新鲜胚胎移植周期中卵裂期胚胎移植后的植入率。然而，胚泡存在缺陷特征。与卵裂期胚胎移植的女性相比，寻求胚泡期胚胎移植的女性由于胚胎发育不良或被阻止而未能达到胚胎移植，尤其是那些只有少数3天卵裂期胚胎和那些胚胎移植的女性，另外预后也不良。因此，单一囊胚转移策略主要推荐给预后良好的女性，可能有更多的卵裂期胚胎可用于延长培养。

　　除胚胎选择外，改善种植周围子宫环境也可以提高单胚胎移植后的成功率。卵巢刺激后施用促性腺激素的超生理水平或类固醇激素的增加，可能对子宫内膜发育产生不利影响。卵巢刺激后的子宫内膜已显示出组织学进展，基因表达改变和结构异常。在冷冻保存技术的发展中，胚胎可以更安全地冷冻和保存以供以后使用。选择性冷冻胚胎移植避免了子宫内膜暴露于卵巢刺激的不良后遗症，并且已经显示出比新鲜的更高的生命率。然而，在排卵期妇女中，冷冻胚胎移植似乎与新鲜胚胎移植一样有效且安全，以实现活产。在先前的试验中，胚胎移植已完成在卵裂阶段，最多转移两个胚胎；多胎妊娠的比例高达约30％，导致孕产妇和胎儿发病率增加。在过去的5年中，随着囊胚培养技术的完善和符合减少多胎妊娠风险的指导方针 ，单个囊胚转移的应用已变得越来越流行。与新鲜的单个胚泡移植相比，冷冻单个胚泡移植可以优化妊娠率并维持围产期安全性。

　　在这项随机试验中，研究人员比较了冷冻与新鲜单个胚泡移植后的妊娠结局和产科及围产期并发症。在该研究中，每组分配825名妇女，并纳入分析。冷冻单囊胚转移导致单胎活产率高于新鲜单囊胚转移。中度或重度卵巢过度刺激综合征的风险，妊娠丢失，其他产科并发症和新生儿发病率在两组之间相似。冷冻单囊胚转移与先兆子痫风险较高相关。

　　总而言之，单个冷冻胚泡移植的单胎分娩率高于排卵期妇女新鲜单个胚泡移植，而且预后良好。冷冻胚泡移植后，先兆子痫风险增加值得进一步研究。

　　参考信息：

　　https://www.thelancet.com/journals/lancet/article/PIIS0140-6736(18)32843-5/fulltext

　　4.新鲜胚胎与冷冻胚胎治疗多囊卵巢综合征不孕

　　新鲜胚胎的移植通常优于体外受精（IVF）冷冻胚胎的移植，但有证据表明冷冻胚胎移植可以提高活产率，降低卵巢过度刺激综合征和妊娠并发症的发生率。患有多囊卵巢综合征的妇女。

　　体外受精（IVF）被广泛用作不育症治疗药物，已帮助全世界500多万婴儿顺利出生【1】。然而，人们担心妇女及其婴儿的手术安全性。【1，2】 卵巢过度刺激综合征（由卵巢肿大，血管通透性增加和腹部腹水增加以及血管内血液浓缩引起）是卵巢刺激潜在的危及生命的并发症【3】。通过体外受精设计的妊娠与孕产妇和 包括先兆子痫，早产，出生体重低和先天性异常在内的新生儿并发症多于自然妊娠【4-7】。多囊卵巢综合征患者进行体外受精的妇女发生卵巢过度刺激综合征的风险增高，并在妊娠后期出现并发症【3，8】。

　　当这种胚胎可用时，大多数试管婴儿单位通常采用新鲜胚胎移植。 在一些情况下，所有的胚胎都可以在没有新鲜胚胎移植的情况下进行冷冻保存，最常见的是在发生过量卵泡发育时预防卵巢过度刺激综合征。 卵巢恢复后，解冻胚胎并在程序化激素替代生理周期后转移至子宫以制备子宫内膜。 随着新鲜胚胎移植，用于卵巢刺激或由此产生的超生理学性类固醇的药物可能改变子宫内膜容受性【9-11】，并对滋养层细胞侵袭或胎盘形成不利影响【12】。

　　观察性研究表明，冷冻  -胚胎移植后单胎妊娠率高于新鲜胚胎移植【13】。对11项观察性研究的分析显示，冷冻  -胚胎移植妊娠与早产风险较低，低出生体重和围产期死亡率均高于新鲜胚胎移植妊娠【14】。随后，比较这两种方法的小型单中心随机研究显示，随着冷冻  -胚胎移植，持续妊娠率更高【15】。然而，随机数据缺乏试验来确定两种程序在出生率和妊娠并发症方面的差异。

　　研究人员设计了一项多中心随机对照试验，以评估在多囊卵巢综合征不育患者中，初始冷冻  -胚胎移植是否会导致活产出生率更高，治疗相关性和随后的妊娠并发症少于新鲜胚胎移植。

　　结果显示，冷冻胚胎移植导致第一次移植后的活产率高于新鲜胚胎移植（49.3％比42.0％），速率比为1.17（95％置信区间[CI]，1.05至1.31；P = 0.004）。 接受冷冻  -胚胎移植的女性的妊娠丢失频率也较低（22.0％比32.7％），比率为0.67（95％CI，0.54至0.83； P<0.001），以及卵巢过度刺激综合征 （1.3％比7.1％），比率为0.19（95％CI，0.10至0.37； P <0.001），但先兆子痫发生率更高（4.4％比1.4％），比率为3.12 （95％CI，1.26至7.73； P = 0.009）。 其他妊娠和新生儿并发症的发生率没有显着差异。 冷冻胚胎组有5例新生儿死亡，新鲜胚胎组有5例（P = 0.06）。

　　该研究证明，在多囊卵巢综合征的不孕妇女中，冷冻胚胎移植与活产率较高相关，卵巢过度刺激综合征的风险较低，首次转移后先兆子痫的风险高于新鲜胚胎移植。

　　原文链接：

　　https://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMoa1513873

　　5.排卵妇女新鲜胚胎与冷冻胚胎的移植

　　在之前的研究中显示选择性冷冻胚胎移植导致多囊卵巢综合症无排卵妇女的新生儿出生率高于新鲜胚胎移植。 目前尚不确定冷冻  -胚胎移植是否会提高不育患者的排卵率。

　　自从有体外受精（IVF）技术，这40多年来，其得到迅速的发展。 关于体外受精（IVF）技术的研究包括控制性卵巢刺激与促性腺激素，其使得获得的卵母细胞数量增加，并且胚胎冷冻保存，这使得可以保存剩余的胚胎用于进一步使用，从而增加IVF周期后的累积活产率。观察性研究【1，2】和小规模随机对照试验【3-5】显示，使用冷冻胚胎移植的妊娠率和围产期结局高于新鲜胚胎移植。 据推测，冷冻  -胚胎移植可以通过避免卵巢刺激后发生的超生理状态而为胚胎着床和安置提供更有利的宫内环境。

　　研究人员在之前进行了一项随机对照试验，涉及多囊卵巢综合征女性，其中研究人员比较了新鲜胚胎移植和所有胚胎的冷冻  -胚胎移植后的选择性冷冻。被指定进行冷冻胚胎移植的女性的活产率比那些被指定进行新鲜胚胎移植的女性高，这主要是由于较低的妊娠流失率。冷冻胚胎组中的妇女的卵巢过度刺激综合征的发生率也较低，但先兆子痫的发生率较高【6】。然而，多囊性卵巢综合征患者的生殖，代谢环境与其他女性不同不孕；它以高雄激素血症和胰岛素抵抗为特征，并且这些患者通常对卵巢对促性腺激素刺激的反应比对接受IVF的排卵女性更大。研究人员设计了本次随机控制试验以评估冷冻胚胎移植与新鲜胚胎移植相比对排卵妇女活产率和母亲和新生儿并发症的影响。

　　研究结果显示，冷冻胚胎组和新鲜胚胎组的活产率没有显着差异（分别为48.7％和50.2％；相对风险为0.97； 95％置信区间[CI]为0.89至1.06； P = 0.50）。 植入率，临床妊娠率，总体妊娠丢失率和正在进行的妊娠率之间也没有显着的组间差异。 冷冻胚胎移植导致卵巢过度刺激综合征的风险显着低于新鲜胚胎移植（0.6％比2.0％；相对风险0.32,95％CI 0.14-0.74； P = 0.005）。 产科和新生儿并发症及其他不良后果的风险在两组之间没有显着差异。

　　该研究证明，新生胚胎移植和不孕不育患者之间的胚胎移植和冷冻胚胎移植之间的活胎率没有显着差异，但冷冻胚胎移植导致卵巢过度刺激综合征的风险较低