人乳铁蛋白（LT）酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名：人乳铁蛋白（LF）酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中乳铁蛋白(LF)的含量。
实验原理
本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中人乳铁蛋白（LF）水平。用纯化的人乳铁蛋白（LF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入乳铁蛋白（LF），和HRP标记的LT抗原，使它们竞争结合，，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。样本颜色的深浅和样品中的乳铁蛋白（LF）的含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人乳铁蛋白（LF）的含量。
试剂盒组成
1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 8 | 标准品S1（150μg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 标准品S2（100μg/ml） | 0.5ml×1瓶 | |
3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 标准品S3（50μg/ml） | 0.5ml×1瓶 | |
4 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 标准品S4（25μg/ml ） | 0.5ml×1瓶 | |
5 | 显色剂B液 | 6ml×1瓶 | 标准品S5（12.5μg/ml） | 0.5ml×1瓶 | |
6 | 终止液 | 6ml×1/瓶 | 9 | 说明书 | 1份 |
7 | 样品稀释液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 封板膜 | 2张 |
标本要求
1．标本处理：（1）水样 采集后经 -20℃反复冻融三次，再经玻璃纤维过滤后，备查
（2）组织 样品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相关文献提取进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，备查
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 加样：分别设标准孔、空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加50微升，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
7. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。