荧光能量共振转移 (FRET)
检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具,广泛应用于生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等。
原理
当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠,并且两个分子的距离在 10nm 范围以内时,就会发生一种非放射性的能量转移,即 FRET 现象,使得供体的荧光强度比它单独存在时要低的多(荧光猝灭),而受体发射的荧光却大大增强(敏化荧光)。
应用
1、生物大分子结构和功能研究:细胞膜受体之间相互作用、细胞内分子之间相互作用、膜蛋白的定位修饰、检测酶活性变化等2、核酸杂交分析
3、免疫分析:不仅适用于小分子 (如半抗原),而且适用于大分子 (如蛋白质)。
特点
1、实验背影低,但抗原、抗体纯度要求较高;
2、简便的均相检测(不需要洗板),操作简单;
3、实验产物比较稳定,可用于固相分析或利用特殊的荧光显微镜进行单细胞分析,但需要特殊的辅助设备;4、应用灵活多样检测组合丰富,需要融合蛋白的表达5、可用于复杂环境下的分析,研究活细胞生理条件下研究蛋白质-蛋白质间相互作用。
6、有效的作为 1.0~10.0nm 距离范围。
Duolink PLA 技术
蛋白质全面分析技术,完成对蛋白质互作及其修饰的检测、定量以及确定细胞定位等
原理
Duolink?实验基于邻位连接技术(PLA),当一对
PLA probes 足够接近时(<40 nm)会产生 PLA 信号,由于 PLA probes 特异识别一抗,PLA
信号的强弱直接反映了蛋白表达量水平或蛋白互作的强度, 利用显微镜可以观察到 PLA 信号及其位置。
应用
1、检测稳定、瞬时和微弱的蛋白互作
2、检测蛋白的翻译后修饰
3、高灵敏性的检测低丰度蛋白的表达
特点
1、可用于未修饰的细胞和组织,可以检测单一的目标蛋白。
2、识别同一目标的两个不同抗原表位,灵敏度和精确度远高于单个表位识别。
3、通过一对邻位探针环化并且进行滚环扩增,更有利于信号的放大。
4、凭借探针锚定目标蛋白,从而准确的定位目标。
5、针对不同的细胞,组织进行比较和定量分析,能够自动的筛分靶分子。
综上比较,FRET 技术可应用于检测某一细胞中两个蛋白质分子是否存在直接的相互作用。实验材料简便样本量要求低,减少复杂操作导致的实验结果误差较大;低空间分辨率、高灵敏度及适用于复杂体系。
并且高时间分辨率,可以迅速的跟踪记录下 rds 甚至级时间内的距离变化,所以适用于酶的催化、肌肉收缩、信号传递、主动运输等方面的研究。可用于高通量筛选等技术优势。
目前,新开发出的标记方法有酶催化插入、荧光类似物等等。根据
FRET 技术的特点,它在均相荧光免疫分析及核酸分子杂交方面具有广泛的应用前景总之,FRET
技术以其独特的优越性,在今后的科研中,将与荧光显微镜结合,用于单个活细胞的分析,使人们对生命现象奥秘的探索向前迈进。
我所发展可实现靶蛋白结构稳定性分析的时间分辨紫外激光解离质谱法发布时间:2024-04-08 | 供稿部门:1822组 | ......
阿尔茨海默病(AD)又称老年痴呆,起病隐匿,病程缓慢且不可逆,以智能障碍为主。随着人口老龄化的进展,全球AD患者数量逐年增加,严重危害中老年人的健康,也给家庭和社会带来沉重的负担。回望2023年,AD......
叶绿体是植物进行光合作用的细胞器。正常发育过程受到核基因组和叶绿体基因组在多个层次的协同调控。核质互作的分子机理是叶绿体生物发生的核心科学问题之一。光合膜蛋白复合体的反应中心亚基通常由叶绿体基因编码,......
复旦大学超高分辨率蛋白生物药质谱分析系统采购国际招标招标项目的潜在投标人应在通过复旦大学采购与招标管理系统(以下简称电子采购平台,网址为:https://czzx.fudan.edu.cn)在线获取招......
控制KRAS:揭示关键癌症蛋白的变构位点研究人员在基因组调控中心和威康萨克研究所利用深度突变扫描技术全面识别了蛋白质KRAS中的变构控制位点,该蛋白质是许多类型的癌症中最常见的突变基因之一。科学家们使......
神经退行性疾病,如帕金森病或阿尔茨海默病,与大脑中蛋白质聚集的沉积有关。当细胞废物清除系统存在缺陷或超负荷时,这些聚集物会积累。一种主要与免疫系统信号传导过程相关的蛋白质NEMO可以防止帕金森病中发生......
——第三届尿液生物标志物学术研讨会(Urimarker2023)顺利召开11月4日-11月5日,第三届尿液生物标志物学术研讨会(Urimarker2023)于北京师范大学圆满落幕。本次研讨会采用线上线......
想象一下,科学家们用手电筒探索一个黑暗的房间,却只能清楚地辨认出光束范围内的东西。说到微生物群落,他们历来无法看到光束之外的东西---更糟糕的是,他们甚至不知道这个房间有多大。在一项新的研究中,来自美......
几十年来,科学家们已经知道,“垃圾DNA(junkDNA)”实际上起着至关重要的作用:尽管基因组中的蛋白编码基因提供了构建蛋白的蓝图,但是基因组中的一些非编码部分,包括以前被认为是“垃圾DNA”的基因......
德国科隆大学的研究人员在NatureAging期刊发表了题为:InplantaexpressionofhumanpolyQ-expandedhuntingtinfragmentrevealsmecha......