制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法) ↓ 用10%FCS RPMI1640调整细胞浓度为5x106~1x107/ml ↓ 取40ul细胞悬液加入预先有特异性McAb(5~50ul)的小玻璃管或塑料离心管,再加50ul 1∶20(用DPBS 稀释)灭活正常兔血清 ↓4℃ 30min 用洗涤液洗涤2次,每次加洗涤液2ml左右1000rpmx5min ↓ 弃上清,加入50ul工作浓度的羊抗鼠(或兔抗鼠)荧光标记物,充分振摇 ↓ 4℃ 30min 用洗涤液洗涤2次,每次加液2ml左右1000rpmx5min ↓ 加适量固定液(如为FCM制备标本,一般加入1ml固定液,如制片后在荧光显微镜下观察, 视细胞浓度加入100~500ul固定液) ↓ FCM检测或制片后荧光显微镜下观察(标本在试管中可保存5~7天)
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