实验方法原理 |
定量PCR(即时聚合酶链锁反应,Real-time Polymerase Chain Reaction,简称 Real-time PCR、即时PCR),又称定量即时聚合酶链锁反应(Quantitative real time polymerase chain reaction,简称 Q-PCR/qPCR/rt-qPCR、定量即时PCR、即时定量PCR),是一种在DNA扩增反应中,以萤光染剂侦测每次聚合酶链锁反应(PCR)循环后产物总量的方法技术。 |
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实验材料 | 限制性内切核酸酶 反转录酶 热稳定 DNA 聚合酶 dCTP 靶核酸 |
试剂、试剂盒 | 扩增缓冲液 dNTP 贮存液 胎盘 RNase 抑制剂 |
仪器、耗材 | 琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶 屏蔽型枪头 离心管 正向排液式移液器 PCR 仪 |
实验步骤 |
一、材料 展开 |
注意事项 |
RT-qRCR影响分析可靠性关键点(Key point): 1.分析结果依赖于模板的数量、质量以及合理的检测方法设计 2.反转录反应的非标准化影响试验的稳定性 3.数据分析应该高度客观,如果不合理的分析,从分析结果中会得到混淆的错误结果,因此通过对RT-qPCR的每一组分进行质量评价以达到最小化变异性,最大化可重复性,而且还需要沿用一个通用的数据分析的指南。对基因表达分析的标准化的需要是与人类临床诊断分析相适应的。
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