真核细胞利用DEAE葡聚糖的转染实验

DNA

TBS DMEM 葡聚糖 DMSO PBS

培养箱 离心管

1.  接种约5×10⁵小鼠L型成纤维细胞/10 cm培养皿，培养3天至30%~50%汇片。

2.  对每个待转染培养皿，用乙醇沉淀4 μg 待转染的质粒DNA，在组织培养橱中晾干沉淀，重悬于40 μl TBS中。

3.  吸去培养液，用10 ml 1×PBS洗涤培养皿，再用4 ml 完全DMEM-10NS洗1次。

4.  将DNA缓慢地（同时不断晃动试管）加入80 μl 预热的10 mg/ml DEAE-葡聚糖/TBS中。用200 μl 的移液器逐滴加120 μl DNA/DEAE-葡聚糖至每个培养皿中，使其均匀地覆盖整个培养皿表面，轻轻旋动使之均匀一致，直到获得一致的红颜色。在加湿的CO₂培养箱中培养4 h（对某些类型的细胞可短一些）。

5.  从培养血中吸去含DNA/DEAE-葡聚糖的培养液。加5 ml 10%DMSO/PBS冲击细胞。室温下放置1 min，吸去DMSO，用5 ml 1×PBS洗1次，吸去毎个培养皿中加10 ml 完全培养液。

6.  培养细胞，在适当的时同进行分析。