基因组文库的扩增实验

λ 噬菌体文库 大肠杆菌铺平扳细菌

氯仿 SM

LB 或 NZCYM 琼脂平板 Sorvall SS-34 或相当型号 加热设备或水浴

一、材料

1. 缓冲液和溶液

氯仿

SM

2. 培养基

LB 或 NZCYM 琼脂平板（150 mm)

LB 或 NZCYM 顶层琼脂糖

3. 离心机和转子

Sorvall SS-34 或相当型号

4. 专用设备

预置于 47℃ 的加热设备或水浴（用于顶层琼脂糖）

5. 载体和菌株

λ 噬菌体文库

大肠杆菌铺平扳细菌

二、方法

1. 为了扩增 λ 噬菌体文库，将含 10000~20000 个重组噬菌体的 50 μl 或更少体积的多个包装混合物组分与 0.2 ml 铺平板细菌在 13X100 mm 试管中混匀，37℃ 温育 20 min。

2. 加 6.5 ml 已熔化的 47℃ 的琼脂或琼脂糖至感染细胞的第一个试管中，通过轻拍或温和地涡旋振荡混匀，立即倒入新鲜灌制的 150 mm 平板内的底层琼脂上。对余下的感染细胞重复该过程。

3. 将平板于 37℃ 最长放置 8~10 h。

4. 将平板中加入 12 ml SM ( 如果用烤盘，则加 150 ml), 4℃ 水平放置过夜。

5. 将所有平板中的 SM 都收集至一个单独的无菌聚丙烯离心管或瓶子中。每个平板再加 4 ml SM 进行冲洗，与最初回收的 SM 液合并。加入 0.2 ml 氯仿至回收的扩增噬菌体培养物中，室温放置 15 min，并偶尔轻轻摇晃使氯仿裂解所有的感染细胞。

6. 4℃ 4000 g ( 5800 r/min 在 Sorvall SS-34 中）离心 5 min，去掉细胞和琼脂糖碎片。

7. 将上清转移至新的无菌试管或瓶子中。将扩增噬菌体文库分成数个组分，4℃ 保存。用噬菌斑分析测定文库滴度。