实验方法原理 | 大多数的信使RNA(mRNA)都带有poly(A)尾,而结构RNA没有。使用本工作方案,可以将带poly(A)的RNA从rRNA和tRNA中分离出来。 |
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实验材料 | RNA |
试剂、试剂盒 | NaOH 寡聚脱氧胸苷纤维素 poly(A)样品缓冲液 LiCl EDTA TE 乙酸钠 |
仪器、耗材 | 离心机 分光光度计 摇床 |
实验步骤 |
1. 先用10 ml 5 mol/l NaOH清洗硅化的层析柱,然后用水冲洗。
3. 用10~20 ml 加样缓冲液平衡柱子,至流出液pH约7.5。
4 于70℃加热含2 mg 总RNA的水溶液10 min,再用10 mol/l LiCl调节溶液中LiCl至终浓度0.5 mol/l。
5. 加RNA溶液至oligo(dT)柱,并以1 ml poly(A)加样缓冲液洗涤,将流出液重新上柱2次以上。
6. 用2 ml 中度洗脱缓冲液洗柱子,用盛有2 ml 2 mmol/l DETA/0.1%SDS的试管收集洗脱的RNA溶液。
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其他 |
来源于《cDNA微阵列技术中内标 Poly (A )+ RNA 的制备》
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