三氯乙酸沉淀法
实验方法原理 | |
---|---|
实验材料 | 样品 |
试剂、试剂盒 | 预冷三氯乙酸 乙醇 乙醚 |
仪器、耗材 | Whatman GF-C玻璃纤维膜 多功能真空仪(Fisher) 20 ml 闪烁瓶 闪烁计数器 |
实验步骤 |
1. 加入 20 μl 预冷的 10% TCA 停止反应,充分混匀,冰浴 10 min 以沉淀蛋白质。 2. 将样品点在真空仪中的 Whatman GF-C 玻璃纤维膜上,待样品通过膜后用 500 μl 预冷的 5% TCA 洗样品管,并将洗后的液体也点在膜上。 3. 用 5 ml 5% 的预冷 TCA 溶液洗膜 4 次,用 10 ml 95% 的乙醇洗一次,再用 10 ml 乙醚洗 3 次,使膜干燥。 4. 将干燥后的膜放入 20 ml 闪烁瓶,在闪烁计数器中用契仑科夫(Cerenkov)射线计数。
展开 |
注意事项 |
1. 乙醚是易燃品,因此带乙醚操作时必须在通风橱中进行,并远离火源和热源。乙醚洗液应被妥善处理。 2. 如果需对每分钟蜕变次数(dpm)定量,将干燥后的膜放入10 ml 的闪烁液中计数。 3. 膜用 95% 乙醇清洗后可直接用于 Cerenkov 射线计数。假如用此膜进行闪烁计数,乙醚的清洗很重要,因为TCA(可被乙醚洗掉)在闪烁液中可导致强的化学发光,使计数失去意义。
展开 |