发布时间:2019-09-14 08:18 原文链接: 醛缩酶的测定实验

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  • 醛缩酶的测定实验

  • 标签:                                    D-果糖-1                                    6-二磷酸 磷酸丙糖-裂解酶 果糖-二磷酸醛缩酶 酶学实验手册 第三章

                       

  • 基本方案

           

实验方法原理 D-果糖-1,6-二磷酸 ⇌ 二羟基丙磷酸盐+3-磷酸-D-甘油醛


D-甘油醛-3-磷酸以酰肼的形式,腙在 240 nm 处有吸收光。

实验材料

醛缩酶

试剂、试剂盒

肼硫酸盐 FDP-Na3H

仪器、耗材

分光光度计

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」


0.9 ml 测定混合物


0.1 ml 醛缩酶溶液


每隔 10 min 记录 240 nm、25℃ 处的吸光值,空白对照用水取代果糖-1,6-二磷酸

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注意事项
其他

试剂:


3.5 mmol/L 肼硫酸盐溶于 1 mmol/L EDTA 中,pH 7.5[溶解 445 mg(Mr=130.1)和 372 mg EDTA·Na2·2H2O(Mr=130.1)和 372 mg EDTA·Na2·2H2O(Mr=372.2)在 1 L H2O 中,并用 1 mol/L NaOH 调节到 pH 7.5]


12 mmol/L果糖-1,6-二磷酸(FDP-Na3H,Mr=406.1;487 mg 溶于 100 ml H2O,调节至 pH 7.5)


溶解醛缩酶,大约 1 U/ml(使用前准备)

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