Southern 印迹
放射性标记的探针与固定化核酸进行杂交
实验方法原理 | 硝酸纤维膜或尼龙滤膜对单链DNA的吸附能力很强,当电泳后凝胶经过DNA变性处理,覆以上述滤膜,再于其上方压上多层干燥的吸水纸,借助它对深盐溶液的上吸作用,凝胶上的单链DNA将转移到滤膜上。转移是原位的,即DNA片段的位置保持不变。转移结束后,经过80℃烘烤的DNA,将原位地固定于膜上。 |
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实验材料 | 基因组 DNA |
试剂、试剂盒 | 限制性缓冲液 |
仪器、耗材 | 琼脂糖凝胶 |
实验步骤 |
1. 7~20 μg 基因组 DNA 稀释到 500 μl 合适的限制性缓冲液中。4℃ 过夜。 展开 |
注意事项 |
在膜上阳性反应呈带状。实验中应注意以下问题:转膜必需充分,要保证DNA已转到膜上。杂交条件及漂洗是保证阳性结果和背景反差对比好的关键。洗膜不充分会导致背景太深,洗膜过度又可能导致假阴性。若用到有毒物质,必需注意环保及安全。
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其他 |
分子杂交是基因探测的基础,除了用印迹杂交外,还有斑点杂交法。即将DNA样品变性后直接点在硝酸纤维滤膜上,再与探针杂交,或者将细胞或病毒点在膜上,菌落或菌斑原位地吸附在膜上,经过变性处理,再进行杂交。斑点杂交多用于病原体基因,如微生物的基因,但也可用于检查人类基因组中的DNA序列。
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