全自动在线固相微萃取测定水中氯霉素其他分析技术

下密封、避光保存，使用时应恢复至室温，并摇匀。使用时，取适量标准储备液，用纯水稀释至所需浓度。

　　在线固相萃取条件

　　目标分析物的在线萃取条件详见表1及表2。

　　UPLC-MS/MS 条件

　　质谱条件：氯霉素用负离子模式(ESI-)的毛细管电压3.0 kV;萃取电压3 V;透镜电压0.1 V;离子源温度120℃;脱溶剂温度450 ℃;辅助气流速1000 L/h;锥孔N2流速50 L/h;碰撞气Ar流速0.15 mL/min。目标分析物的质谱检测参数详见表3。

　　方法优化

　　1.样品PH

　　当样品的PH=7时,目标化合物的信号较强。氯霉素在水溶液PH=4.5-7较稳定，碱性条件下，氯霉素不稳定，易发生水解。在酸性条件下，可发生酰胺水解，选择PH=7作为样品PH。

　　2.萃取柱

　　在富集柱选择上，当使用HLB萃取柱时，氯霉素的响应值明显高于C18柱。由于两种目标化合物有羟基，带有一定极性。C18柱为反向萃取柱，对极性化合物保留较差。HLB柱也为反向萃取柱但因其载体中带有特殊亲水基团对极性化物也有较好的富集效果，吸附效果较传统硅胶基质SPE(如C18)好，选择HLB柱作为萃取柱。

　　3.流动相

　　当流动相为乙腈-0.1%甲酸水时，氯霉素信号大幅下降。当流动相为乙腈-水时，氯霉素的信号增强。酸性条件下不利于氯霉素负离子电离，氯霉素液相流动相条件选择乙腈-纯水。

　　4.上样溶液

　　本在线固相萃取系统把四元泵中A相溶液作为上样溶液,通过四元泵把样品富集到HLB小柱。上样溶液对富集效果影响较大。当使用0.05%甲酸溶液作为上样溶液时，目标物响应值下降，选取100%纯水作为上样溶液。

　　方法验证

　　标准曲线绘制

　　用纯水将混合标准溶液稀释成浓度为10、20、40、80、160、320 ng/L的系列工作溶液，在最佳试验条件下进行测定，以各化合物峰面积Y对质量浓度X进行线性回归，两种抗生素的回归方程、相关系数和方法检出限见表4。

　　从表中可以看出，氯霉素10-320 ng/L浓度范围内峰面积与质量浓度呈现良好的线性关系。目标抗生素的方法检出限为氯霉素：1.63 ng/L，测定下限为氯霉素：

　　6.52 ng/L，可满足水环境中抗生素痕量分析的要求。

　　方法准确度与精密度

　　取空白水样(纯水)，加入一定量的标准溶液，获得10 ng/L的加标样品，全过程分析，平行测定11份，做精密度测试，相对标准偏差见表5。

　　取实际水样，加入一定量的标准溶液，获得100 ng/L的加标样品，全过程分析，平行测定11份，做加标回收测试，各组分回收率表6。

　　从表中可以看出，空白水样平均加标回收率为94.2%-115.9 %，地表水水样平均加标回收率为88.12%-102.90%，方法的准确度良好。空白加标水样测试的相对标准偏差为5.74%，地表水加标水样测试的相对标准偏差为6.34%，方法的精密度良好，满足水中检测要求。

　　结论

　　相对于传统固相萃取技术，在线固相微萃取技术前处理简单，仅需将20 ml水样过0.22μm滤膜，每个样品检测时间为11分钟，能节省大量前处理时间和人力成本。传统固相萃取技术因上样时间，洗脱速度等条件不易控制，实验误差与人操作关系较大。在线固相微萃取技术能减少人为误差，提高实验重复性。本文方法使用MRM模式进行定量，CAP的方法检出限为1.63 ng/L，线性范围为10-320 ng/L，相关系数R=0.9999，实际水样回收率为80.69%-102.90%，相对标准偏差为6.34%，满足水中痕量分析的要求。