QuEChERS_液相色谱_串联质谱法同时测定鱼肉中30种激素类及氯霉素类药物残

摘要: 建立了鱼肉中8 种雌激素、5 种雄激素、6 种孕激素、8 种糖皮质激素及3 种氯霉素类药物多残留的QuEChERS /液相色谱－ 串联质谱(LC － MS /MS) 同时测定方法。均质样品用水分散后加乙腈提取，经分散固相萃取净化后，采用ZORBAX Extend-C18色谱柱(100 mm × 2. 1 mm，3. 5 μm)分离，分别在电喷雾正、负离子模式下以多反应监测(MRM)方式检测。正离子模式下的流动相为水－ 乙腈，负离子模式下的流动相为0. 1%氨水－ 乙腈。结果表明，30 种药物在相应的质量浓度范围内线性良好，相关系数均大于0. 99，在3 个加标水平下的平均回收率为63%～ 118%，相对标准偏差(RSD) 为3. 8%～ 18. 2%，检出限(LOD，S /N≥3) 和定量下限(LOQ，S /N≥10)分别为0. 03 ～ 1. 6 μg /kg 及0. 10 ～ 5. 0 μg /kg。市售多种鲜活鱼类的测定结果表明，该方法简便快速、灵敏可靠、经济有效，适用于鱼肉中激素类及氯霉素类药物多残留的同时快速测定。

    激素类药物主要包括雌激素(Estrogens)、雄激素(Androgens)、孕激素(Progestogens)及糖皮质激素(Glucocorticoids)等，因其具有影响动物性别分化、缩短动物生长周期的作用，常被非法用于水产养殖中，以提高水产品的养殖效率。氯霉素类(Chloramphenicols)药物具有广谱抗菌能力，也被广泛用于水产养殖业。这些药物一般较稳定，不易降解，在水产品中的残留可通过食物链进入人体，激素类药物在体内仍具有生物活性可严重影响人体的正常生理功能，更严重的是这5 类药物具有致突变、致畸形、致癌的潜在危害［1］。已有研究表明，儿童性早熟、妇女乳腺癌和子宫癌发病率的上升与动物源性食品中性激素残留有关［2］，氯霉素类药物则会对人体造血机能产生严重的副作用［3］。因此，欧盟、国际食品法典委员会(CEC) 、美国、日本等均对动物源性食品中激素的残留作出了严格要求。我国农业部176 号公告明确规定，禁止饲料和动物饮用水中添加己烯雌酚、雌二醇等雌激素，炔诺醇、左炔诺孕酮、炔诺酮等孕激素，苯丙酸诺龙等雄激素以及蛋白同化激素; 235 号公告规定己烯雌酚、醋酸甲羟孕酮、丙酸睾酮、苯丙酸诺龙、甲基睾酮等化学合成类激素在动物性食品中的最高残留限量(MRL) 为不得检出。对于氯霉素类药物，包括我国在内的大多数国家都对其MRL 作了规定。
    上述药物残留的检测方法主要有酶联免疫法［3］、液相色谱法(HPLC)［4］、气相色谱－ 质谱法(GC －MS)［5 － 6］及液相色谱－ 串联质谱法(LC － MS /MS)［7 － 13］等。虽然简便快速的酶联免疫法具有较高的灵敏度，但易出现交叉反应及假阳性; HPLC 法仅靠保留时间定性，抗干扰能力差且灵敏度不能满足残留检测要求; GC － MS 则需对样品进行繁琐的衍生化处理。LC － MS /MS 技术无需对样品进行衍生化处理，可同时测定多个目标物，具有高选择性、高灵敏度、高通量的优势，弥补了前述方法的诸多不足，使得该技术在食品安全分析中得到广泛应用。
    目前，测定某一类激素或氯霉素残留的LC － MS /MS 方法已较为成熟，同时测定多类激素残留的
LC － MS /MS 法亦偶有报道［14 － 19］，但同时测定鱼肉中4 类激素及氯霉素类药物残留的液相色谱－ 串联质谱法尚未见报道。QuEChERS 是由美国化学家Lehotay 和德国的Anastassiadas 于2003 年提出的一种快速(Quick)、简便(Easy)、便宜(Cheap)、有效(Effective)、可靠(Rugged) 及安全( Safe) 的样品处理技术［20 － 22］，最早在农药多残留中使用。本文采用先进的QuEChERS 技术进行样品处理，通过优化样品前处理条件及色谱－ 质谱条件，建立了一次同时提取、正负离子模式分别测定雌激素、雄激素、孕激素、糖皮质激素和氯霉素类共5 类30 种药物残留的新方法。本方法可为鱼类产品药物多残留的定性定量分析提供技术保障，亦可为其他动物源性食品中的兽药多残留分析提供借鉴。