液相色谱法如何用于药物分析？

    液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。如今，该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。尤其是在药物分析领域，有着广泛的应用。
 

　　液相色谱在药物分析中的应用，主要考虑试样的预处理和分析柱、检测器的选择。在试样的预处理上，日前兴起的固相(微)萃取使得许多含量低的成分得到精制提纯，从而适于液相色谱的测定。中药中有些紫外吸收，或无特征紫外吸收的成分，直接用液相色谱测定，其灵敏度和分离度都不尽人意，利用柱前或柱后衍生化法可使这些成分较地测定出来。对于极性大、脂溶性差物质，在YWGCl8柱上不易保留，用十二烷基磺酸钠作为离子对试剂，降低其极性，延长柱上的保留时间，取得较好的分离较果。
 

　　将液相色谱和质谱这两个强有力的分析技术在线连接在一起，经过三十年的发展已成为一项较为成熟的分析手段，但是它从形成伊始就存在着问题：从液相色谱流进质谱时，流动相的变化、溶剂的组成、高温高压离子化的问题制约着这种联用技术发展。大气压离子化接口具有去除溶剂和离子化的双重功效，它的引入使得该技术在各个领域得到了广泛的应用。电喷雾离子源是一种软电离技术，一般只生成(M H) 和(M-H)-两种分子离子峰，选择性监测(mz)190的负分子离子峰，具有较高的灵敏度、准确度、专一性，满足了低浓度药物研究的需求。
 

　　三维液相色谱法可以同步测定葛根素和阿魏酸两种指标。通过实验证明：如果选择合适的柱温等色谱条件，乙醇作为反相液相色谱流动相，分析中药及中成药中有效成分，既安全又准确。结构相似的物质，普通的检测器难以检测出来，液相色谱-电化学法可以有效地测定黄连粉中仅差一个基团的黄芩苷和黄芩素的含量。样品经色谱柱分离后收集，再经荧光分光光度计测荧光强度，影响因素多，测定复杂。改进后的液相色谱-荧光法则可以不经衍生化和收集分离物，只经化学处理除杂，浓缩后直接进样即可。用该法测定贯叶连翘中金丝桃素的含量也取得了较好的结果。液相色谱-示差折光测黄芪精口服液中黄芪甲苷的含量也都取得了较为满意的结果。对于只有紫外末端吸收，用紫外检测时灵敏度低，基线易漂移，示差折光检测其易受外界条件干扰，蒸发散射检测器能克服以上不足，响应值只与样品质量有关，其信号相应与质量成正比，不同化合物，质量相同则信号相应基本一致。蒸发光散射检测法是基于不挥发样品分子对光的散射程度与其质量成正比，与其所含基团性质无关。只要选择适当的检测器参数，便可使流动相和溶剂完全气化，不产生信号，而样品中的各个组分以不挥发粒子存在，对光有散射，以被检测出来。因此，蒸发光散射检测器可用于含不同基团的多组分同时分离、分析。和紫外、荧光等方法相比，蒸发光散射检测法对不同物质有近似相同的响应因子。
 

　　在谈到药用辅料检测中的其他液相色谱检测方法时，液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术作为微量元素测定的有效途径之一，液相色谱高分离度与电感耦合等离子体质谱低检测性、宽动态线性范围及能同时测定多种元素、跟踪元素的变化等特点融合，目前已广泛的用于食品、环境、体内外药物分析中微量元素的测定。该方法应用于药用辅料中微量元素砷、汞、铬等检测的探索性研究项目已在试验室开展。目前虽罕见相关报道，随着技术的成熟与仪器的发展，其在药用辅料检测中有着广泛的应用前景。同时，液相色谱-核磁共振联用技术因仪器昂贵，核磁共振灵敏度相对较低，液相色谱需使用氘代溶剂，溶剂信号易对样品产生干扰等，使其在药物分析中广泛应用存在一定障碍，但核磁共振在结构分析方面有独特的优势，能够提供丰富的结构信息，弥补液相色谱通用检测器只能得到非常有限的结构信息的不足，在实际药用辅料杂质分析中已进入使用阶段。
 

　　综合上述研究成果可以知晓，目前液相色谱法在药物分析领域的应用是多方面的。而且为了满足特定的检测需求，液相色谱与多种其他方法、其他仪器联合，不断改进自身缺陷，为药物分析提供更佳的解决方案。相信这项技术在未来还会有更广阔的应用空间。