赤霉素对α－淀粉酶诱导形成实验

实验方法原理：大麦或小麦种子吸水萌动后，胚的糊粉层中便产生赤霉素。这些赤霉素被释放到胚乳中后，能诱导，提高一些水解酶如β－1，3－糖苷酶，蛋白酶，核糖核酸酶，α－淀粉酶等酶的活性。其中研究得最彻底，最深入的是赤霉素对大麦糊粉层中α－淀粉酶诱导形成。赤霉素诱导或提高一些水解酶的活性对种子萌发过程中的物质转化和器官建成具有重要意义。没有胚的种子由于不能产生赤霉素，胚乳中便没有α-淀粉酶。

实验步骤：一、材料与设备

小麦种子

分光光度计或光电比色计，烧杯，移液管，水浴锅，试管，刀片，镊子，青霉素小瓶，恒温箱。

药品

0.1%淀粉溶液：可溶性淀粉1克加蒸馏水50 ml ，沸水浴至淀粉完全溶解后，再加入KH₂PO₄ 8.16克，待其溶解后定容至1000 ml 。

2×10^－5 M  GA3溶液：680毫克GA3溶于少量95%乙醇中，再定容至1000 ml 。

I2－KI溶液：0.600克碘化钾和0.060克碘（I2）分别用少量0.05N HCl溶解后混合，用0.05N HCl定容至1000  ml

1%次氯酸钠溶液。

10^－3 M 乙酸缓冲液：10^－3 M 乙酸钠溶液590  ml 与10^－3 M 乙酸溶液410  ml 混合后，加入1克链霉素，摇匀。

二、实验步骤

1．选籽粒饱满大小一致的大麦种子50粒，用刀片将每粒种子切成有胚和无胚的两半，分别放入新配制的1%次氯酸钠溶液中消毒15分钟，再取出用无菌水冲洗几次。在无菌条件下，吸胀48小时。

2．将2×10^－5 M 的GA3稀释为2×10^－6 M ，2×10^－7 M ，2×10^－8 M 的溶液；将10^－3 M 乙酸缓冲液稀释1倍。

3．取青霉素小瓶6个，编号，按下表加入试剂和材料：

4．将小瓶放进恒温箱中，在25℃下振荡培养24小时。如无振荡器，应经常摇动。

5．淀粉酶活力测定：从每个小瓶中吸取上清液0.2  ml 加入含1.8  ml /0.1%淀粉溶液的相应标号的试管中，混匀。然后于30℃水浴中准确保温10分钟（保温时间最好经预备实验确定，以光密度达0.4－0.6的反应时间为宜）。再加入I2－KI溶液2  ml ，用蒸馏水稀释至5  ml ，充分摇匀。此溶液呈蓝色，可用红色滤光片或在580n M 的波长下比色。以蒸馏水作对照。