一、酶免ELISA试剂盒特异性要素
1、固相载体的挑选.ELISA中常用的固相载体有微量滴定板、小珠和小试管三种,以微量滴定板最为常见.它具有杰出的吸附功能,孔底透明度高,空白值低,各板之间、同一板各孔之间功能附近.聚苯乙烯ELISA板因为质料的不一样和制造技能的不同,各商品的质量区别很大.因而,在挑选试剂盒一起要对其运用的微孔板类型进行认证,评价。
2、包被物的纯度.在酶联免疫测定特别是直接ELISA中,试剂的特异性取决于运用抗原的纯度.现在因为技能条件的约束,包被用抗原或抗体的纯度不也许到达100%,所以有些非特异性显色不行防止,只能尽也许进步纯度,进步特异性.现在运用的包被抗原通常为合成多肽抗原。
3、包被抗体的效价.具有高亲和力和高特异性的包被抗体,是决议试剂特异性的主要方面。
4、关闭.是ELISA中主要的一步,意图是关闭固相载体表面尚未被所占据的空地,削减后续步骤中非特异性蛋白的搅扰。
二、ELISA试剂盒检验标本中含有酶符号物的搅扰物
1、内源性搅扰物:类风湿因子（RF）、黄疸等,类风湿因子是可作用于多种动物以及人IgGFc段的自身抗体,大都为IgM类,能充任抗原成分与固相及酶标抗体反响,然后呈现非特异性显色。
2、外源性搅扰物,常常因样品收集、储存、处理不妥形成如样品溶血,被细菌污染,标本凝聚不全等.溶血标本,红细胞溶解决裂,释放出血红素形成,而血红素中的铁卟啉是过氧化物酶的类似物,以HRP为符号的ELISA测定中,溶血标本也许会增加非特异性显色.如有细菌污染,菌体中也许含有内源性HRP（辣根过氧化酶）,有国内报导酶免HBsAg试剂检查溶血标本时可形成假阳性。
三、ELISA试剂盒操作进程中的疑问形成假阳性
1、加样 ：对于直接ELISA标本通常都要进行稀释,假如加样禁绝就会形成误差,特别当稀释倍数大时,很小的误差,会致使较大的相对误差,使阴性（或弱阳性）标本呈阳性（或阴性）.加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留意不行溅起,不行发生气泡。
2、洗刷：在ELISA中准确的洗刷是确保得到可重复成果的关健一步,应引起操作者注重，无论是手工操作仍是机器操作,得出不准确的成果常与不准确的洗刷有关,ELISA即是靠洗刷来到达别离游离和的酶符号物的意图.经过洗刷以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体的物质,以及在反响进程中非特异性吸附于固相载体的搅扰物质。
3 、温育 ：每种试剂都有其反响形式,其中温度和温育时刻操控是主要要素.因孵育温度高,反响时刻长,会形成整板本底高,阳性率高.温育通常用湿盒或水浴,反响板不宜叠放,以确保各板温度都能迅速平衡,为防止蒸腾,板上应加盖。
4、酶标仪判读 ：作为记录测定成果的仪器,酶标仪的功能安稳与否,决议成果的牢靠度.首要酶标仪应定时进行养护,对滤光片要定时校对;其次酶标仪波长设置要准确,运用双波长,一个检查波长,一个参比波长,以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度区别形成的光搅扰.此外,在用酶标仪读数时先擦试微孔板底部并压平板条。
综上所述,因为酶联免疫吸附技能现在在技能上缺乏标准化,虽然现在国际上以及我国有了部分标准血清或参比血清（血清盘），但因为受方法学及技能条件的约束,在酶联吸附测定中有时不行防止的会呈现必定的非特异性,但咱们能够经过以上措施把非特异性显色降至最低限底,然后进步检查的特异性,并得到更准确、牢靠的试验成果。
