氨基酸分析方法及仪器比较

一、氨基酸分析方法分类

氨基酸分析按其分离和检测方法的不同可分为三大类型。第一类是基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法（IEC）。此类方法由Stein和Moore两人1958年发明，并于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。

第二类是所有基于反相色谱分离、柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相法（HPLC）。

第三类是阴离子交换分离直接安培法检测的离子色谱法IC，严格说来，阴离子交换和阳离子交换都叫“IEC”，在此将阴离子交换分离、安培检测的方法归类为IC，是因为这类仪器实际上就是离子色谱仪，只不过配置侧重点为氨基酸分析。本文中对三类方法多用简称。

说明：

1、PITC异硫氰酸苯酯；OPA邻苯二甲醛；FMOC 9-芴基甲氧羰酰氯；AQC 6-氨基-喹啉基-N-羟基琥贝酰亚胺-氨基甲酸酯；DABS-Cl 二甲基氨基偶氮苯磺酰氯。

2、IEC法也可使用柱后OPA衍生（荧光检测），可以降低检测限到1pmol，但无法检测二级氨基酸。

二、用户如何选择适合自己的方法和仪器

氨基酸分析的方法和仪器多种多样，用户应该根据自己的实际应用情况和发展趋势来选择方法和仪器。选择时可参考以下几个方面：

1、是否需要对分析结果负责（如对外出具报告等）

IEC仪器使用茚三酮柱后衍生法，符合国家标准和国际仲裁标准，而IC法和HPLC法虽然总体性能也比较稳定可靠，但其测量结果与茚三酮法有较大差异，且结果难以长期重复，这对于仲裁不利。

目前，IC法和HPLC法分析氨基酸一般仅用于不太深入的研究，而且主要是利用其灵敏度较高的特性。也有部分企业用来做内部质量控制（国家没有制定相关标准），但如果要考虑对外做样并出具结果报告，IEC仪器是唯一选择。由于国内的氨基酸分析呈现急剧上升的势头，而很多单位经济能力有限，因此也确有不少单位购买专用氨基酸分析仪作为创收手段。

2、一次进样需要出峰的数量是多还是少

氨基酸种类繁多、性质接近，因此氨基酸分析是色谱界公认的难题，尽管现在有多种多样的方法，但没有任何方法能够保证所有氨基酸峰能够一次进样完全的分离。仅仅从分离程度来说，好的HPLC方法最多可以一次分离检测20种左右的氨基酸峰，IC法最多可一次分离检测约30种氨基酸峰（理论上说来，IC法可达到与IEC法相当的出峰数量，但金电极的基线漂移较大，保留时间太长的峰就难以定量分析），IEC法最多一次可分离检测50种左右的氨基酸峰。

从这个角度来说，如果您需要分析游离氨基酸样品，就应当选择IEC仪器。

3、氨基酸分析频率高还是低

氨基酸样品分析频率如果达到每个星期至少1次，就可以算“频率较高”，少于每周1次就可以说是“较低”。频率较高时，应当仪器专用化（即便是用HPLC和IC法，也应专用于氨基酸分析），因为反复更换柱子和缓冲体系不仅麻烦、平衡时间长，难以保证分析结果的可靠性和重复性，而且容易损坏仪器。

4、氨基酸样品总量是多还是少

总体的成本应考虑到做样成本，而不能只看仪器本身。HPLC做氨基酸分析时，每根柱子只能进样100～500针，而IEC仪器的柱子都超过1000针（sykam柱子使用国产试剂时大于4000针，使用进口试剂时大于6000针）。