五分类血液分析仪工作原理

五分类血液分析仪和三分群血液分析仪相比，由于增加了对嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞的常规检测，更能满足临床需要，因此将逐渐进入各级医院检验科为能选择一台适合自己医院的五分类血液分析仪，现对五分类血液分析仪的白细胞分类原理和代表型号做简要分析。

1电阻抗、高频电导及激光散射联合检测法

即库尔特公司的VCS技术。V：代表体积容量（volume）也就是库尔特首创发明的电阻抗原理。把电阻法微孔技术应用于计数血细胞和测定其体积的大小。C：代表传导性即电导（conductivity）。指一束电磁波或称射频。穿透细胞的传导性，它取决于细胞的大小和内部结构；经校正后的传导性叫opacity即“不透明性”。这时不再反映细胞大小。而是反映细胞内部的结构。像核的大小，核浆比例和密度等。S：代表散射（scatter）。指在不同角度测得的散射光强度。由于各类细胞的表面结构不同和颗粒大小不同而对光的散射各异，进而区分各类细胞。库尔特公司设计在单一通道上同时用这三种方法对同一白细胞进行测量，避免了有些血液分析仪要设计好几个通道或加染色试剂的麻烦。仪器具体的运作是：根据流体力学的原理，应用鞘流技术使溶血后剩余的白细胞和网织红细胞单个通过检测器，接受VCS三种技术的同时检测，完成白细胞分类过程。VCS技术在Coulter公司的STKS型、MAXM型以及Gen.s型五分类血液分析仪上均已成功的应用。而且MAXM型和Gen.s型可计数网织红细胞，Gel1.S型可选配自动制血片机。以上几种型号还可直接计数CD和CD.淋巴细胞，并算出其比率。

2光散射和细胞化学染色联合检测法

即利用激光散射和过氧化物酶染色技术进行细胞分类。利用光散射的原理计数血细胞，因细胞表面结构不同，在不同角度上散射光有差别，有助于对白细胞的区分。白细胞化学染色即是在稀释液中加入过氧化酶（MPO）的底物及现色剂，根据白细胞对MP0的反应分类。中性细胞MP0为强阳性，嗜酸性细胞阳性更强，单核细胞为弱阳性，淋巴细胞性，嗜碱性细胞亦为阴性，故综合光散射和细胞化学染色的特点，在电脑显示屏上可得到类似流式细胞仪的二维或三维图像一一不同颜色的散点图。并可打出分类结果。由于嗜碱性细胞不含此酶，不能被检测。因此一些仪器专门设置了嗜碱性细胞检测系统。它的测量通道采用时间差的方法，与RBC／PLT的测量系统共用一个通道。在激光技术中目前有半导体激光和气体激光。半导体激光功率弱，但作为细胞分类自己足够；气体激光功率强二者比较半导体激光具有寿命长（7～1O年）体积小，启动快。耗电小，对稳压要求低，更为‘经济适用等特点。Bayer公司的的ADVIA120型和2120型血细胞分析仪是用光散射原理进行血细胞分析的代表。Sysmex公司的SF-3000型血细胞分析仪也用此原理进行工作。

3电阻抗和射频电导联合检测法

这种方法是分别采用四个检测系统来检测不同类型的细胞①淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测系统：在细胞悬浮淮中加入溶血剂使红细胞溶解，而使白细胞保持完整，细胞浆及核形态近似于生理状态，当这些细胞通过检测系统时，对白细胞进行电阻抗法（测量细胞体积）和射频电导法（检测细胞核和颗粒密度）的联合检测，结果将细胞分成淋巴细胞、单核细和中性粒细胞三个群体。②嗜酸性细胞和嗜碱性细胞两种检测系统：在细胞悬浮液中加入特殊的溶血剂，除嗜酸性细胞和嗜碱性细胞外，其他细胞均被溶解或萎缩。再对保持完整的嗜酸性细胞或嗜碱性细胞进行计数。③幼稚细胞检测系统：在细胞悬浮液中加入硫化氨基酸，由于占位不同，结合在幼稚细胞的氨基酸比成熟细胞多。且对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂时。成熟细胞被溶解，只保留着可能存在的幼稚细胞用来计数。Sysmex公司的SE一9000血细胞分析仪就是采用这种方法进行五分类的。该仪器可显示及打印四个直方图、两个散点图。一个报告表以及FLAG信息等。但该仪器配套的Labman中文软件却无法打印散点图。SE一9000血细胞分析仪有监测造血干细胞的功能。SE一9000血细胞分析仪和该公司研制的SP100自动制片染色机以及R3000／2000网织红细胞计数仪组合起来，加上一个电脑工作站。构成一套该公司称为HST的系列，即可形成全部血细胞分析自动化系统。

4多角度激光偏振光散射检测法

采用这种技术的仪器使用鞘流液将标本血稀释，稀释后白细胞的内部结构近似于自然状态，只有嗜碱性细胞由于其吸湿的特性而使细胞结构有轻微改变。红细胞内的血红蛋白在高渗透压的作用下。从细胞中分离出来。而鞘流的水分则进入红细胞内。使细胞膜结构仍然完整，它与鞘流的折光系数相同，不影响白细胞的检测。仪器同时从四个角度来检测通过激光束的细胞所产生的散射光，因为细胞大小、折射指数、核形、核浆比率以及颗粒性质等，均可影响在不同角度测得的散射光量。O.前角散射光用来测定细胞的体积，1O.狭角散射光用来测定细胞结构。9O.垂直散射光对细胞内部颗粒及细胞质进行测量，9O.消偏振光散射将嗜酸性细胞从中性粒细胞和其它细胞中分离出来。所有原始数据，借助先进的电脑软件处理，在屏幕上显示6个散点图和2个直方图。