纸层析分离过程中的平衡结束后，将滤纸点样的一端浸入溶剂中，在溶剂液面距原线距离约1cm时开始展开，当溶剂前沿到达滤纸另一端0.5～1cm时展开结束，取出滤纸，在溶剂前沿处做一标记，晾干或用冷风吹干。展开所用溶剂必要时用离心机进行预处理。
按溶剂在滤纸上流动方向的不同，有上行展开、下行展开、环形展开和双向展开四种方式。
1、上行展开：
将滤纸点样的一端向下浸入溶剂中，溶剂因毛细管引力作用从下向上流动。
上行展开操作简单，重现性好，是最常用的展开方法，但展开时间较长。
2、下行展开：
在层析缸上部有一盛展开剂的液槽，将滤纸点样的一端向上浸入槽中，溶剂主要靠重力作用自上而下流动。
下行展开法展开速度快，但迁移率重现性较差，斑点易扩散。
3、环形展开：
将样品点于圆形滤纸距圆心1cm左右的环形线（原线）上，滤纸水平放置，溶剂由滤纸条引向圆心，然后不断向四周水平方向流动，展开的图谱呈弧形。采用环形法展开时，最好使用无方向性的特制滤纸。
4、双向展开：
如果样品组分较多，用一种溶剂（常为酸性）不能将各组分全部分开时，可将样品点在方形滤纸的一角，用一种溶剂展开后吹干，将滤纸转动90度后再用另一种溶剂（常为碱性）展开。