小耗材大智慧之液相色谱柱（二）

四、常用色谱柱

我们常见的色谱柱品牌有waters、安捷伦、赛默飞、岛津、shodex、大赛璐、还有被大曹三耀收购的资生堂，国内品牌比较出名的就是月旭、依利特了。

我们再看看各种各样的键和相都是啥。

这么多的键和相到底应该怎么选，有没有规律呢，必须有啊，往下瞅瞅。

又想起了化学老师那句万能的箴言：“结构决定性质，性质决定用途。”结构和性质还决定了这伙计需要用什么柱子分离。

了解被分离物有何区别?有无可电离集团?电离常数?PH如何影响色谱分析?比如下图PH对分离的影响。

常规的硅胶基质色谱柱不能耐受高PH，可以选择杂化硅胶颗粒或者聚合物基质的色谱柱，多点键和的色谱柱在高PH下也会比单点键和的色谱柱寿命更长。下图便是某位小姐姐家的色谱柱在高PH下硅胶溶解的图片。

五、如何更好的使用色谱柱，延长柱寿命?

1、拿到色谱柱后先阅读说明书，了解色谱柱的具体性能：耐受温度、耐受PH等。以及色谱柱的冲洗和保存条件。经过柱校测试确认色谱柱本身没有问题后方可正常使用。

2、样品充分前处理，确保样品的洁净;使用保护柱或在线过滤器，根据实际情况更换保护柱芯或滤片。

3、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。

4、应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中如果流动相中使用了缓冲盐，避免出现盐析。

5、选择使用适宜的流动相(尤其是pH)，以避免固定相被破坏，PH过低共价键断裂，键和相水解;PH过高硅胶溶解。

6、色谱柱使用过程中，如果压力升高，或出现污染，选择适当的条件冲洗或反冲。

适用于C18、C8、C4、C1、苯基、PFP、AQ等

使用至少20倍柱体积的含有≥30%谁的极性邮寄溶剂(如乙腈)作为流动相除去柱子中的缓冲盐;使用至少20倍柱体积的含有95%极性邮寄溶剂(如乙腈)冲洗色谱柱。

污染物的去除常规星期后柱校没有明显恢复时，使用50%异丙醇/乙腈以低流速清洗20倍柱体积以除去污染物。(以上操作可根据实验室自身SOP视情况而定，此方法仅为赛默飞针对自己品牌的反相色谱柱冲洗的参考意见)

适用于氨基柱、氰基柱

常规清洗：乙腈：水=60;40条件对色谱柱进行冲洗，清洗时不建议水相比例超过40%，过高使用水相容易导致键和相水解。

色谱柱再生：当色谱柱经过长期使用，柱校降低时，可以对色谱柱进行再生，乙腈：水(水中加入0.05%氨水)=60:40条件冲洗30倍柱体积。(以上操作可根据实验室自身SOP视情况而定，此方法仅为赛默飞针对自己品牌的色谱柱冲洗的参考意见)

适用于离子交换柱SCX、SAX冲洗方法

日常冲洗：用100%水冲洗30个柱体积除盐，然后用20%甲醇或乙腈冲洗20个柱体积后保存在20%甲醇或乙腈中。

长期保存：用100%水冲洗30个柱体积去除盐，然后用50%乙腈;50%水冲洗20个柱体积后保存在50%乙腈：50%水中。

再生：先用高浓度的缓冲盐(不超过1M)，然后再用100%水洗，100%乙腈或甲醇冲洗，再用20%乙腈或甲醇保存。(以上操作可根据实验室自身SOP视情况而定，此方法仅为赛默飞针对自己品牌的色谱柱冲洗的参考意见)

色谱柱是个很厉害的角色，希望有机会我们一起探讨!