手把手教你安装毛细管柱（二）

  步骤 6：进行气体检漏

　　在色谱柱加热前，一定要对GC系统进行检漏。当我们对进样口和检测器进行载气检漏时，使用电子检漏计是最为有效的方法之一。建议不要使用Snoop等肥皂泡，它有可能由被检测处进入色谱柱和其它装置中，从而对系统有所损害。而且不能使用Snoop对正在加热的进样口和检测器装置进行检漏。如果一定要用液体检漏，建议使用50/50的异丙醇/水的混合溶液。

　　步骤 7：确定载气流量，再对色谱柱的安装进行检查

　　警告：如果不通入载气就对色谱柱进行加热操作，就会快速并且永久性地损坏色谱柱。当色谱柱安装好后，再依照步骤4对载气流量进行确认，或者使用非保留化合物样品进行检测，我们可以通过分析得到的样品谱图来确认进样口和检测器的安装是否正确。表3中列出了常用的非保留化合物样品。

　　实验过程：如果使用分流/不分流进样口，将色谱柱的温度保持在35-40℃，使用分流模式进样1-2mL样品。如果使用的是不分流大口径进样口，由于样品不被分流进样，进样前应先对样品进行稀释，以免得到饱和的平头峰形。这样，我们应该得到一张峰形尖锐的谱图，而使用不分流大口径进样口，色谱峰可能会有轻微拖尾。如果得不到色谱图，有可能是根本就没有载气通过系统。那就需检查一下调节器、气体附件和流量控制器的设置是否正确。当然也可以是检测器、记录仪和注射针等出了问题。如果色谱峰有明显的拖尾现象，可能是进样口有泄露，或是色谱柱安装不完整，也有可能是分流比设 置得太低等。我们需要重新对色谱柱进行安装并对进样口进行检漏。只有完全解决了这个问题，才能进行下一步。

　　注意：

　　1.对于PLOT柱，以上大多数化合物都有明显地保留吸附

　　2 .不要直接液体进样;建议使用顶空进样装置

　　3 .当温度小于100℃时，乙腈在大多数的色谱中都有保留。使用时需将色谱柱的温度提高到

　　步骤 8：色谱柱的老化

　　色谱柱安装和系统检漏工作完成后，就可以对色谱柱进行老化了。对色谱柱升至一恒定温度，通常为其温度上限。特殊情况下，可加热至高于最高操作温度10-20℃左右。但是一定不能超过色谱柱的温度上限，那样机易损坏色谱柱。升温速度一定要快，不要将程序升温的速度设定的太慢。当达到老化温度后，记录并观察基线。比例放大基线，以便容易观察。初始阶段，基线应持续上升，在到达老化温度后5-10min开始下降，并且会持续30-90min。当达到一个固定的值后，基线就会稳定下来。如果在2-3小时后基线仍无法稳定或在15-20分钟后仍无明显的下降趋势，那么有可能系统装置有泄露或污染。遇到这样的情况，应立即将柱温降至40℃ 以下，尽快地检查系统并解决相关的问题。如果还是继续地老化，不仅对色谱柱有损害，而且始终得不到正常稳定的基线。另外，老化的时间也不宜过长，不然会降 低色谱柱的使用寿命。一般来说，涂有极性固定相和较厚涂层的色谱柱老化时间较长，而弱极性固定相和较薄涂层的色谱柱所需时间较短。而PLOT色谱柱的老化方法又各不相同，具体步骤请参阅岁柱子的操作说明书。如果在色谱柱没有与检测器连接就进行老化，那么老化后，色谱柱末端部分可能已被破坏。要先把柱末端10-20cm部分截去，再将色谱柱连接到检测器上。

　　温度限定是指色谱柱能够正常使用的应用温度范围。如果操作温度低于色谱柱的温度下限，那么分离效果和峰形都不会很理想。但这样对色谱柱本身并无什么损害。

　　温度上限通常有两个数值。数值较低的是恒温极限。在此温度下，色谱柱可以正常使用，且无具体的持续时间限制。较高的数值是持续升温的升温极限。该温度的持续时间同产干部多于十分钟。高于温度上限的操作则会降低色谱柱的使用寿命。

　　步骤 9：设置确认载气流速

　　对于毛细管色谱柱，载气的种类首选高纯度氦气或氢气。建议不要使用氮气做载气。载气的纯度最好大于99.995%，而其中的氧气含量越少越好。通常载气级或超高纯度氦气和氢气中氧气的含量小于2ppm。如果您使用的是毛细管色谱柱，那么依照载气的平均线速度(载气流动的速度cm/sec)而不是利用载气流速(载气流量mL/min)来对载气作出评价，这样不仅简单而且非常方便。因为柱效的计算采用的是载气的平均线速度，而不是体积流速。

　　我们进一针非保留样品(见表3)，确定它的保留时间。

　　表3 常用的非保留化合物样品

　　然后按下列公式计算平均线速度(V)：

　　不要使用色谱仪上的流量计去设置载气流速，可能不准。大多数情况下，采用流速范围的中间值较为适合。载气速度(流速)会随着柱温的改变而改变，请在温度恒定的情况下测量其具体数值。

　　步骤 10：柱流失检测

　　在色谱柱老化过程结束后，利用程序升温做一次空白试验(不进样)。一般是以10℃/min从50℃升至恒温极限，达到恒温极限后保持10min。这样我们就可以得到一张流失图。我们可以看出到一定程度，基线会快速地上升。使用记录装置将基线记录下来，并记录下50℃ 和恒温极限时的信号值。这些数值可能对今后做对比试验和实验问题的解决有帮助。在空白试验的色谱图中，不应该有色谱峰出现。如果出现了色谱峰，通常可能是 从进样口部位来的污染物。如果在正常的使用状态下，色谱柱的性能开始下降，基线的信号值将会增高。另外，如果在很低的温度下，基线信号值明显大于初始值 (与最初使用得到的结果比较)，那么最有可能的是色谱柱和GC系统有污染。

　　步骤 11：分析实验混合测试样品

　　最后，我们利用对混合测试样品的分析来确认色谱柱的安装和性能。建议使用我们提供的对色谱柱质量检定所提供的标准样品。有时，对于一些比较特殊的分析，我们 采用适合于鉴定系统性能的样品进行分析。每一根新色谱柱都带有一张柱性能测试谱图，在相同于图中实验条件和测试样品的情况下，我们应该得到与标准测试相同或相近的谱图。如果试验的重复性很差，有可能是色谱柱的安装、实验的操作或仪器本身出现了问题。那么在正式做其他样品之前，要解决掉所有出现的问题。