乳品中黄曲霉毒素检测（二）

针对乳品企业黄曲霉毒素超标，分析原因是由于奶牛食用了霉变饲料，导致乳汁中黄曲霉毒素M1超标。因此乳品的黄曲霉毒素污染主要来源是饲料，像玉米、稻谷、豆粕等，放久得饲料就可能发霉产生这种毒素。然而即使是牛奶加工中用高温的巴氏杀菌法也无法清除黄曲霉毒素，因此从源头严格监控和检测，是避免此类事件发生的有效办法。

以上两款仪器作为华夏科创的明星产品已在全国市场广泛推广，我们仍在持续努力的为客户开发出更好的产品，提供更完善的解决方案，为老百姓的饮食安全健康建起一道屏障。

月旭公司推出乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的检测方案

近日，蒙牛纯牛奶被检测出强致癌物——黄曲霉毒素M1，消息一出顿时又掀起一股食品安全隐患的讨论。相比之前的三聚氰胺，黄曲霉素是否更难检测?月旭公司技术部迅速组织相关技术人员讨论和开发应用解决方案，现已整理出全套的专业检测方案，让乳和乳制品中黄曲霉毒素M1无处躲藏。

1. 试用范围

牛奶，奶粉，发酵乳，干酪，奶油等乳制品

2. 方法原理

黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂，因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取，对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化，荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素M1。

3. 所需设备和耗材

黄曲霉毒素免疫亲和柱：Welchrom? IAC (1ml，25支/盒;3ml，15支/盒)(上海月旭提供);

高效液相装置带荧光检测器;

均质机;

水平振荡器;

SPE转接头及50ml大容量上样器：Welchrom? SPE Adapter(上海月旭提供);

分析天平(精度0.02 g);

SPE装置带抽真空系统：Welchrom? SPE Device(上海月旭提供);

黄曲霉毒素M1标准品;

PBS 缓冲溶液：称取1.16 g Na2HPO4，0.20 g KH2PO4，8 g NaCl和0.2 g KCl 溶于900ml水中，用HCL或NaOH调节pH至7.4，然后定容至1000ml;

甲醇(色谱纯);

乙腈(色谱纯);

正己烷(分析纯)。

4. 样品前处理

牛奶样品

称取25g(精确至0.01 g)混匀的样品，置于50 mL具塞离心管中，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液，待净化;

发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)

称取25 g(精确至0.01 g)混匀的样品，用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.4，9500r/min下均质5 min，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液，待净化。

乳粉和粉状婴幼儿配方乳制品

称取10 g(精确至0.01 g)样品置于250 mL烧杯中，加入50 mL约50 ℃的水于乳粉中，玻璃棒搅拌均匀。溶解后冷却至室温，移入100 mL容量瓶中，水洗烧杯并转移洗涤液，用PBS定容至刻度后装入离心管6000转/分钟下离心15 min，混合上清液，取50mL上清液待净化。

干酪

切取均质的样品5g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中，加2 mL水和30 mL甲醇，9500 r/min下匀浆5 min，超声提取30 min，6000r/min下离心10 min。收集上清液并移入250 mL分液漏斗中，同时加入30 mL正己烷，振摇2 min，分层后，弃去正己烷层。重复用正己烷提取2次。提取液减压浓缩至约2 mL，转移浓缩液至离心管，烧瓶用甲醇-水溶液(1+4)5 mL分2次洗涤并倒入50 mL离心管中，加PBS溶液稀释至50 mL，6000r/min下离心5 min，上清液待净化。

奶油

称取5g(精确至0.01 g)试样，置于50 mL烧杯中，用20 mL正己烷将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇，振荡30 min后，将全部液体移于分液漏斗中，待分层后，将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中，旋转蒸发仪减压浓缩至约5 mL，加PBS稀释至约50mL，待净化。

5. 免疫亲和柱净化(3cc)

将IAC装于固相萃取装置上，接上大体积上样器，10ml PBS溶液活化柱子，流速保持在2–3 ml/min，确保上样前柱子保留少量(0.5ml)的PBS溶液，活化液不收集;

将待净化液加入免疫亲和柱，流速不超过5 mL/min，不收集流出液;

用约20ml去离子水淋洗柱子，流速不超过5 mL/min，抽真空1分钟，不收集流出液;

用1.5ml甲醇洗脱，流速控制在1d/s，收集洗脱液过膜后上机测试。

注：免疫亲和柱从冰箱去除需升到室温后使用

6. 色谱条件：

色谱柱： Ultimate? XB-C18 250 mm x 4.6 mm，5μm(上海月旭提供)

预柱： Ultimate? C18，5μm，ULT5BG18(上海月旭提供)

流动相： 水:甲醇:乙腈=11:4:5

柱温： 35℃

检测波长： 发射波长：365nm，激发波长：450nm

进样量： 100μL

博纳艾杰尔黄曲霉毒素M1&B1检测方案

天津博纳艾杰尔科技有限公司，基于自身技术优势，及对乳品、饲料行业检测多年来的认知，整合出一套黄曲霉毒素检测的综合解决方案，可以提供黄曲霉检测几乎全部所需关键产品。

目前，关于乳品中黄曲霉毒素、食品中黄曲霉毒素的检测，有很多标准，GB、SN,归纳起来，多数采用免疫亲和柱净化-HPLC法检测，以及酶联免疫吸附法(ELISA试剂盒法)。

博纳艾杰尔可以提供整体检测所需关键产品：

类别作用名称规格

关键耗材净化黄曲霉毒素总量免疫亲和柱25支/盒,1mL

关键耗材净化黄曲霉毒素B1免疫亲和柱25支/盒,1mL

关键耗材净化黄曲霉毒素M1免疫亲和柱25支/盒，1mL&3mL

关键耗材净化Cleanert PEP 固相萃取柱60mg/3mL

关键耗材测定Venusil MP C18 液相色谱柱4.6*250mm,5um

关键耗材测定黄曲霉毒素ElISA 试剂盒96孔/48孔

关键耗材测定黄曲霉毒素总量胶体金快速检测卡50条/盒

关键耗材测定黄曲霉毒素总量胶体金快速检测卡50条/盒

关键耗材测定Venusil MP C18 液相色谱柱4.6*250mm,5um

试剂标品测定黄曲霉毒素混标液体(B1、B2、G1、G2)B1 1ug/ml;B2 3ug/ml;

G1 1ug/ml; G2 3ug/ml

试剂标品测定黄曲霉毒素B1标准品1mg

试剂标品测定乙腈，HPLC级溶剂瓶/4L

特殊器材测定黄曲霉素光化学柱后衍生反应池台

仪器测定岛津10AVP PIUS HPLC 单泵、单检测器、工作站带荧光检测器

仪器测定微孔板酶标仪450nm/630nm

仪器测定柱温箱台

咨询电话：400-606-8099

邮箱：service@agela.com.cn

常用检测方法对比：

1 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-HPLC法

黄曲霉毒素免疫亲和柱-高效液相色谱法比传统的HPLC法更加安全,可靠,灵敏度和准确度高.它采用单克隆抗体免疫技术,可以特效性地将黄曲霉毒素或其他真菌毒素分离出来,分离效率和回收率高，是一种准确定性定量的首选方法。

分析原理试样中的黄曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液经过过滤,稀释后,用免疫亲和柱净化,以甲醇将亲和柱上的黄曲霉毒素淋洗下来,在淋洗液中加入溴溶液衍生,以提高测定灵敏度,然后将甲醇-黄曲霉毒素淋洗液的一部分注入HPLC中,对黄曲霉毒素 B1,B2,G1,B2分别进行定量分析.免疫亲和柱是用大剂量的黄曲霉毒素单克隆抗体固化在水不溶性的载体上,然后装柱而成.该方法的测定范围 0-300ug/kg.

参考案例：中草药酸枣仁中黄曲霉毒素的检测

2 酶联免疫吸附法(ELISA法)

原理:将已知抗原吸附在固态载体表面,洗除末吸附抗原,加入一定量抗体与待测样品(含有抗原)提取液的混合液,竞争培养后,在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分,然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物,与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合,再加入酶底物.在酶的催化作用下,底物发生降解反应,产生有色物质,通过酶标检测仪测出酶底物的降解量,从而推知被测样品中的抗原量.

ELISA方法通常用于大规模的筛选，由于其高同量的特点，是一种性价比很高的测试方法。

3一步式黄曲霉毒素检测胶体金试纸法

一步式黄曲霉毒素检测胶体金试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法.由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品,这种方法能估算黄曲霉毒素的含量,非常适用于现场测试和进行大量样品的初选.