不要用纯水清洗色谱柱

请不要用纯水清洗色谱柱，样品分析时，流动相中有机溶剂的含量应保持在4%以上。

具有大表面积、高机械强度、化学纯度高、优化的表面性质、规则的孔结构、较高的碳链覆盖率是今后HPLC柱新一代填料发展的方向；Kromasil就是这种新一代填料的代表，具有耐高压、宽PH范围、峰形对称、高负载等特点；已被广大分析工作者所接受。在使用新一代填料的反相色谱柱时，我们提出如下建议：

1.  不要用纯水清洗色谱柱。因为您现在所用的色谱柱是目前国际市场上广受欢迎的质量好、碳链覆盖率高的新一代填料经高压匀浆填制，填料含碳量在20%左右，硅烷化过程效率高色谱柱，因此，具有柱效高、峰形对称性好等特点。然而对于这种反相填料由于固定相（C18、C8）是强疏水性，而流动相是强极性（如纯水），随着固定相含碳量的增高，这种极性差别会造成流动相与固定相之间的接触角过大（大于90度），在相对微粒孔径较小的情况下，结果可能使流动相被填料的多孔体系排斥，即流动相不流经填料的多孔体系而直接在填料表面流过；由于填料中约99%的表面积是位于微粒内部的小孔形成的，所以会产生分析对象的保留时间前移，有时几乎为零，接近死时间，不能起到分离效果。如果发生这种现象解决的方式是：用2—5倍柱体积的含有40—50%的有机溶剂作流动相冲洗柱子，可使柱子再生，当色谱柱从新平衡后，就可恢复到原来的保留性能。如果您希望清洗色谱柱上的残留缓冲液、盐类和水溶性物质，最好使用不含缓冲液的原流动相进行清洗，例：流动相是20%甲醇—缓冲液，那么您就用20%甲醇—水来冲洗柱子，最后用100%的有机溶剂来清洗除去强的残留物质。
   

2.样品分析时，流动相中有机溶剂的含量应保持在4%以上。通常在反相HPLC分析时，通过调整有机相与水相的比例获的理想的保留值，有机相的比例在10%--90%范围内，对于极性很强的化合物的分离，我们建议流动相中有机溶剂的含量应保持在4%以上。这样可保证流动相及样品全部流经填料内部孔隙，与填料完全发生作用，以达到分离的目的。