四、案例
案例一：完整细胞的相互作用检测
<背景>：单克隆抗体XMetA是胰岛素受体（IR）变构部分的激动剂，其激活代谢Akt激酶信号通路，而对有丝分裂胞外信号调节激酶（ERK）信号通路几乎没有影响。为了研究这种选择性信号通路的性质，作者验证了XMetA对CHO细胞中IR，Akt和ERK的特异性磷酸化和活化的影响。
<目的>：完整细胞亲和力检测。
<方法>：研究者将表达短链型（IR-A）及长链型（IR-B）胰岛素受体的不同浓度CHO细胞分别与XMetA孵育，通过离心获得游离的XMetA，用KinExA仪器检测亲和力。另外，作者采取同样的策略，用KinExA仪器检测胰岛素与CHO细胞表面IR-A，IR-B的亲和力。
<结论>：XMetA与IR-A亚型的亲和力为55±16pM，与IR-B亚型的亲和力为50±11pM。另外，在对照抗体组，胰岛素与IR-A亚型的亲和力为156±14pM；在XMetA组，胰岛素与IR-A亚型的亲和力为216±100pM；在对照抗体组，胰岛素与IR-B亚型的亲和力为221±28pM；在XMetA组，胰岛素与IR-B亚型的亲和力为277±112pM。数据同时说明， XMetA与IR亚型的结合与胰岛素无关。
案例二：细胞与上清未纯化样品检测
<背景>：单克隆抗体（mAb）在体内与膜蛋白间亲和力的可靠评估是肿瘤治疗的主要问题。在BV展示系统中，膜蛋白能以天然状态在病毒表面展示。
<目的>：细胞与上清中未纯化样品亲和力检测。
<方法>：研究者基于KinExA技术，结合杆状病毒（BV）膜蛋白展示系统，描述了一个简单而高度敏感的单克隆抗体评估方法。
<结论>：在BV表面展示的肝癌抗原Robo1吸附到磁珠上（BV beads）,其KD值(~10pM)与全细胞分析方法一致（R2=0.998），表明基于KinExA技术检测方法提供了针对细胞表面蛋白的单克隆抗体亲和力准确的评估。
上图中显示的是KinExA实验中所使用的抗原。A图中可溶性Robo1用于标准的实验分析；B图中表达天然活性Robo1的CHO细胞用4%多聚甲醛固定，用于细胞分析实验；C图中表达天然活性Robo1的BV磁珠用于BV展示分析
下图采用KinExA技术检测抗Robo1抗体与抗原的亲和力。曲线上方的数字代表抗体的活性浓度。
参考文献
Danial M, et al. 2017.Site-Specific Polymer Attachment to HR2 Peptide Fusion Inhibitors against HIV-1 Decreases Binding Association Rates and Dissociation Rates Rather Than Binding Affinity. Bioconjug Chem. 10.1021/acs.bioconjchem.6b00540.
Fleming JK, Wojciak JM. 2017. Measuring Sphingosine-1-Phosphate: Protein Interactions with the Kinetic Exclusion Assay. Methods Mol Biol. 10.1007/7651_2017_5.
Bedinger, D., et al. 2015. Differential pathway coupling of activated insulin receptor drives signaling selectivity by XmetA, an allosteric partial agonist antibody. J Pharmacol Exp Ther 353(1):35-43.