【背景】
CIK
是「Cytokine-Induced Killer Cells」的缩写,中文全称为「细胞因子诱导的杀伤细胞」。 CIK 是单个核细胞在 CD3
单抗和多种细胞因子 (包括 IFN-γ, IL-2 等) 的作用下培养获得的一群以 CD3+CD56+细胞为主要效应细胞的异质细胞群,
其既具有 T 淋巴细胞强大的抗肿瘤活 性,又具有 NK 细胞 (自然杀伤细胞) 的非 MHC (主要组织相容性抗原) 限制性肿瘤杀伤能力。
CIK 细胞具有杀瘤活性高、杀瘤谱广,对正常组织毒性低,体外可高度扩增等特点,是目前 临床上广泛使用的过继性免疫治疗细胞。
DC
是「Dendritic Cells」的缩写,中文全称为「树突状细胞」,因其成熟时伸出许多树 突样或伪足样突起而得名。DC 是由 2011
年诺贝尔奖获得者、加拿大籍科学家 Ralph M. Steinman 于 1973 年发现的,是目前发现的功能最强的抗原递呈细胞
(Antigen Presenting Cells, APC)。已证实,DC 是唯一能够显著刺激初始 T 细胞 (Naïve T cells)
增殖的 APC,而其它 APC (如单核巨噬细胞,B 细胞等) 仅能刺激已活化的或记忆性的 T 细胞。DC 是机体适应性 T
细胞免疫应答的始动者,在肿瘤免疫中具有极其重要的作用。
DC-CIK
即 DC 和 CIK 细胞在体外共培养,然后回输给患者。严格的说,最终的效应细 胞是经 DC 体外活化的 CIK 细胞。多项研究表明,DC 与
CIK 具有协同作用,共同孵育后, DC 表面共刺激分子的表达及抗原递呈能力均明显提高,而 CIK 的增殖能力和体内外细胞毒
活性也得以增强,因此 DC-CIK 较单独的 CIK 治疗更为有效。若将肿瘤抗原负载的 DC 与 CIK 共培养,可刺激产生肿瘤抗原特异性的 T
细胞,这样的 DC-CIK 治疗则兼具特异性和非 特异性双重肿瘤杀伤作用,比未负载肿瘤抗原的 DC 刺激活化的 CIK 活性更强,常被用于
临床和科研。
【培养原理】
1.DC 培养用细胞因子:
GM-CSF (粒细胞巨噬细胞集落刺激因子):
GM-CSF 是一种造血生长因子,在体外可刺激中性粒细胞和巨噬细胞的集落形成, 并具有促进早期红巨核细胞、嗜酸性祖细胞增殖和发育的功能。GM-CSF 是最早被鉴定 出来对于 DC 有作用的细胞因子之一。
GM-CSF 在 DC 培养中的功能是促进单核细胞向大巨噬样细胞分化,细胞表面 MHC II 类分子的表达得以提高,从而增强细胞的抗原递呈功能。此外,GM-CSF 还可促进 DC 的存活。
IL-4 (白细胞介素-4)
IL-4 在由单核细胞诱导成 DC 的过程中发挥的作用是抑制巨噬细胞的过度生长,从 而引导单核细胞向 DC 方向分化。若培养体系中不加 IL-4,单核细胞将分化为巨噬细胞。
同时,IL-4 还有降低细胞表面表达 CD14 分子的能力。CD14 表达水平的降低是单核细 胞分化为 DC 的重要标志。
GM-CSF
和 IL-4 共同作用可使单核细胞定向分化为未成熟 DC (immature DC),此时的 DC
具有较强的抗原摄取和加工能力,但抗原递呈能力很弱。细胞表面中度表达 MHC I 类、II 类分子和 B7 家族分子 (CD80, CD86
等),但不表达 CD14.
TNF-α (肿瘤坏死因子-α)
TNF-α可下调未成熟
DC 的巨胞饮作用和表面 Fc 受体的表达,使细胞内 MHC II 类 分子区室 (class II compartment)
消失,但能够上调细胞表面 MHC I 类、II 类分子和 B7 家 族分子 (CD80, CD86 等) 的表达,使未成熟 DC 分化为成熟
DC(mature DC),此时 DC 的 抗原摄取和加工能力明显减弱,而抗原递呈能力显著增强,可极强的激活 T 细胞。