高效液相色谱法青检测青蒿素

青蒿素是从中药黄花蒿中分离的具有抗恶性疟疾激励的一种化合物，呈无色针状结晶。黄花蒿（Artemisia annua Linn）为中国传统中草药。其有效成分—青蒿素具有良好的抗疟效果。目前青蒿素用于疟疾防治的价值已被人类认识和接受，世界卫生组织已把青蒿素的复方制剂列为国际上防治疟疾的首选药物。

中国知名科学家屠呦呦根据《肘后备急方》等中医药古典文献描述，经过艰苦卓绝的努力并从获取灵感，先驱性地发现了青蒿素。2015年10月5日，瑞典卡罗琳医学院宣布，将诺贝尔生理学或医学奖授予中国药学家屠呦呦以及爱尔兰科学家威廉•坎贝尔和日本科学家大村智，表彰他们在寄生虫疾病治疗研究方面取得的成就。日前，屠呦呦女士在瑞典首都斯德哥尔摩音乐厅举行的2015年诺贝尔奖颁奖仪式上正式领取诺贝尔生理学或医学奖。

青蒿素对疟原虫红内期有直接杀灭作用。对实验动物毒性很低，在机体内吸收快、分布广、排泄快。青蒿素抗疟机理是干扰了疟原虫的表膜——线粒体的功能。本品治疗间日疟、恶性疟平均原虫转阴时间快于氯喹，临床治疗中未见毒副作用，特别在抗氯喹原虫株地区治疗恶性疟和脑型疟更显示出其优越性。通过对青蒿素进行结构改造，找到的新的衍生物——甲基青蒿素和青蒿酯钠——具有更好的效果，甲基青蒿素口服剂量只需青蒿素的 l/6～1/8，且无苦味；青蒿酯钠易溶于水，可用于凶险型疟疾的静脉注射抢救。

中国药典中对青蒿素检测作出了明确规定。RephiLe根据药典与相关文献推出青蒿素含量检测解决方案。该方案采用HPLC检测。详细解决方案如下：

一、实验方法

高效液相色谱法（HPLC）。

二、仪器和试剂

高效液相色谱仪，超声振荡仪，PURIST 超纯水系统。

甲醇。

三、试验方法

1、色谱条件

采用迪马公司 Diamonsil C18 色谱柱，甲醇-水（75 : 25）流动相；流速 1 mL/min；ELSD 温度 40℃，载气压力 3.5 bar，放大系数 9；进样体积 20 μL。

2、标准品溶液配制

精准配置浓度为 250 μg/mL 的青蒿素甲醇溶液，置于棕色容量

3、样品溶液制备

称取 1 g 样品粉末置于三角瓶中，超声处理 15 min，过滤，重复过滤 3 次并合并滤液减压回收溶剂并移至 50 mL 容量瓶中，用甲醇清洗并转移至 50 mL 容量瓶中，甲醇定量至刻度。用 0.45 μm 的 RephiQuik PTFE 过滤后得试液。

4、标准曲线

分别进标准系列溶液 4 μL、8 μL、10 μL、12 μL、16 μL、20 μL 进行 HPLC 分析，然后以峰面积为纵坐标，以青蒿素的含量为横坐标，绘制标准曲线。

5、试样测定

吸取 10 μL 试液进行 HPLC 分析，测定其峰面积，从标准曲线计算得试液中青蒿素的含量。

6、结果计算

样品中青蒿素的含量按下式计算

      式中：

      X一试样中青蒿素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

      c一由标准曲线上查得进样液中青蒿素的量，单位为微克每毫升（μg/mL）；

      V一试样稀释液总体积，单位为毫升（mL）；

      m一试样质量，单位为克（g）；

      计算结果保留两位有效数字。

在使用HPLC检测时，要求必须使用符合中华人民共和国标准GB6682-2008的一级纯水。其他各种标准溶液的配制应该使用二级纯水。一台合格的超纯水机，其超纯水水质水质应该超过或达到GB以及ASTM、CAP、CLSI的一级水标准；能够提供通过各种标准所需的3Q认证服务；可以配合前端的纯水机使用。乐枫提供的Direct-Pure EDI（或Direct-Pure RO）与PURIST的组合套装可完全满足HPLC检测所需。

通常试液上样前需要过滤，除掉试液内的颗粒及微生物，防止色谱柱堵塞、损坏泵等情况发生，保证仪器的操作性能及延长仪器使用寿命。乐枫提供PTFE、Nylon等多种针头式过滤器，适用于各种有机相及水相的样品过滤，保证用户安全使用仪器。