蛋白质分子量的测定：SECMALS与传统校正法（二）

表 1：BSA 单体、二聚体和三聚体的测得分子量

图 4 显示了传统校正法的数据。 色谱图显示了碳酸酐酶（一种标准品）的折光率信号和生成的校正曲线。

图 4：碳酸酐酶色谱图与色谱柱校正曲线重叠。

采用传统校正法测定 BSA 二聚体和三聚体的分子量，结果见表 2，可与表 1 中的 SECMALS数据进行比较。 由于这些寡聚体的结构不再像单体那样是球状的，因此使用色谱柱校正法无法准确计算它们的分子量。 不使用光散射的情况下，无法得知使用色谱柱校正法测得的分子量是否准确。 同样地，这些峰可能被错误地鉴定为三聚体和五聚体。

但是，可通过精确地测定其分子量，使用光散射结果（表 1）正确地鉴定二聚体和三聚体。

表 2：使用色谱柱校正法测得的 BSA 寡聚体峰的分子量。

最后，使用 SEC-MALS 和色谱柱校正法测定了另一种蛋白质（胃蛋白酶）的分子量。色谱图和光散射结果见图 5。 表 3 显示了测得分子量的比较结果。

图 5：胃蛋白酶的色谱图显示 RI（红色）和 SEC-MALS (90°)（桔色）检测器信号。

表 3：通过传统校正法和光散射技术测定的胃蛋白酶分子量

使用 SEC-MALS 正确测得胃蛋白酶的分子量为 35 kDa，而使用色谱柱校正法却错误地测得分子量为 40 kDa。 造成这种结果的原因是胃蛋白酶的结构不是球状，因此比预计为球状蛋白质时的分子量大。 因此，它的洗脱时间较早，而且通过传统校正法记录的分子量比正确值略高。 另一方面，来自光散射的分子量不依赖于洗脱体积，因此可正确测量。

讨论

此应用说明表明，使用 Malvern SEC-MALS 20 系统可成功测定一些蛋白质的分子量。将 MALS 添加至 SEC 系统可实现蛋白质分子量的测定，不依赖于蛋白质的洗脱体积或结构。 使用 SEC-MALS 系统可以正确测量胃蛋白酶和 BSA 寡聚体的分子量，从而实现良好的表征。