芝麻黄曲霉素总量检测

【进口芝麻检出黄曲霉毒素超标】新年初，黄岛检验检疫局发布近期进出口检验检疫情况，进口芝麻中检出了黄曲霉毒素超标等情况受到关注。芝麻是我国主要油料作物之一，且芝麻营养丰富，成为多种食品的主要材料。中国即成为芝麻生产与消费大国。目前我国年食用和加工芝麻约需要110万吨，但芝麻年生产量只有65万-70万吨，产不足需导致2013年前9个月我国芝麻进口量大增。海关、出入境检验检疫等部门对芝麻检测量逐渐增大。

然而，芝麻也是容易感染黄曲霉的农作物之一，黄曲霉毒素对芝麻产品具有较高的亲和性。黄曲霉毒素具有极强的致癌性和毒性，黄曲霉菌的侵染和产生不仅发生在芝麻产品的种植、成熟、收获期中，而且在收获的晾晒、存储及其以后的加工、储运等加工过程中也会产生。我国芝麻种植面积大，地域广泛，且目前我国农村芝麻种植地区尚未实施备案管理或认证资质，国家相关部门无法进行完全控制。此外，我国从国外进口的芝麻也有质量问题，近期，检验检疫局连续检出进口芝麻不合格，黄曲霉毒素超标情况受到关注。

Pribolab(普瑞邦)作为专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商之一，整合了原北京泰乐祺检测应用实验室，专注于霉菌毒素检测产品和技术解决方案的服务,以期快速提出解决方案。针对芝麻中黄曲霉素总量的检测，以稳定、准确、快速、简单为导向，建立了一套完整的解决方案。

参考标准：根据国标《GB/T18979-2003》食品中黄曲霉毒素的测定标准。

（一）免疫亲和柱-高效液相色谱法：GB/T18979-2003国标方法

1. 所需设备和耗材　　

高效液相色谱仪

色谱柱：真菌毒素专用色谱柱（PRC-18，Pribolab）。

免疫亲和柱：PriboFast®黄曲霉毒素总量免疫亲和柱(3ml，25支/盒，IAC-011-3，Pribolab，快速过柱型)。

高速均质器：达到22000rpm 以上(EQ-WR-1L，Pribolab)。

玻璃纤维滤纸：PriboFast®玻璃纤维滤纸（GMF-110，Pribolab）

PriboFast®八位泵流操作架（Pribolab，用于控制免疫亲和柱过柱流速）

标准品：黄曲霉毒素混标（2µg/ml 黄曲霉毒素 B1, G1 和0.5µg/ml黄曲霉毒素B2, G2 (4/1/4/1)，STD#1081，Pribolab）

2. 样品前处理:普瑞邦针对粮谷、油脂、油料等提供不同的处理方案(详细方案请联系普瑞邦，普瑞邦开发了针对不同产品提供优化的处理方案)

3. 免疫亲和柱净化: 

富集:提取液以2-3mL/min流速通过免疫亲和柱，直至2-3mL空气通过柱体；

洗涤: 10mL 0.1%的吐温/PBS清洗，以10mL水洗柱子2次，并使2-3mL空气通过柱体。

洗脱：加入1.0mL色谱级甲醇洗脱,孵育30秒以上,以流速为1-2mL/min过柱，收集全部洗脱液供检测用。

4. 高效液相色谱分析                         

（二）酶联免疫法

1. 方法原理

采用直接竞争酶联免疫法，在微孔板上预包被黄曲霉毒素抗原，加入样本（或黄曲霉毒素标准品溶液）及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素特异抗体。样本或标准品溶液中的抗原与预包被在板孔上的抗原竞争结合酶标抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液，读取吸光值。样品吸光值与其所含黄曲霉毒素总量成负相关，与标准曲线比较即可得出样品中黄曲霉毒素总量的含量。

2. 试剂和材料：酶联免疫试剂盒（PriboFastR黄曲霉毒素总量试剂盒EKT-011，Pribolab）

3. 样本前处理：芝麻及其制品：粉碎、溶解、离心取上清液待测。

4. 检测步骤

4.1 免疫反应30min；洗板5次；显色反应30min；终止反应，酶标仪读OD值。

5. 分析结果的表述

用酶标仪判读结果。

（三）免疫金标快速检测法

1. 方法原理

黄曲霉毒素总量快速检测条应用了竞争抑制免疫层析的原理，样本中的黄曲霉毒素总量在酶标孔中与胶体金标记的特异性抗黄曲霉毒素单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上AF－BSA偶联物的结合。如果样本中黄曲霉素总含量大于0.5 ug/L，检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显红色，结果为阴性。

2. 试剂和材料

胶体金检测试纸：PriboStripTM黄曲霉毒素总量免疫金标快速检测条（PR-011，Pribolab）

3. 分析步骤：芝麻及其制品溶解后取上清液检测。吸取样品滴加到加样孔中，8-15分钟读取结果。在C线显色的情况下：T 线显色比C线深或一样深是阴性。T 线显色比C线浅，或无显色是阳性结果。