早期的基因组DNA甲基化分析技术,如SssI甲基转移酶分析法、氯乙醛反应法、免疫学抗体技术等,已经不能满足现代表观遗传学研究的需求。今年来常用的基因组甲基化的方法有以下两种。
1. 甲基化敏感扩增多态性实验
甲基化敏感扩增多态性实验技术被用于检测双向型真菌的DNA甲基化,它是在扩增片段长度多态性技术的基础上建立起来、基本程序是:提取高质量的基因组DNA,分别用EcoRⅠ/HpaⅡ,EcoRⅠ/MspⅠ两种酶组合对基因组DNA进行双酶切,并连上相应的限制性内切酶的接头,然后以接头序列设计的预扩增引物,进行PCR扩增。扩增产物稀释后,再加入带有选择性碱基的引物,进行第二次PCR扩增,扩增产物变性后在6%的序列胶上进行电泳,最后采用银染或同位素放射
自显影方法处理序列胶,统计和分析DNA条带。这种方法在研究动植物基因组甲基化上有广泛应用。NSAP技术相对其他测定DNA甲基化程度的技术有如下优点:
① 不需要知道被测DNA序列信息,在不同生物上具有通用性,可用于DNA序列背景知识未知的生物。
② 操作相对简便,在AFLP技术体系的基础上无需改进,即可操作。
③ 可在全基因组范围检测CCGG位点的胞嘧啶甲基化变化。
MSAPjishu的局限性在于不能完成非CCGG位点的胞嘧啶甲基化。
2. 高效液相层析及相关方法
高效液相层析能够定量测定基因组整体甲基化水平,其过程是:先将DNA样品经盐酸或氢氟酸水解成碱基,水解产物通过色谱柱,将结果与标准品比较,紫外光测定吸收峰值,计算5rrC/(5rrC+5C)的积分面积得出基因组整体的甲基化水平。
此法相对HPLC,更为简便、快速、经济。测定甲基化的敏感性较高。
PCR检测——ISO标准发布近日,由上海海关主导制定的2项ISO标准正式获得国际标准化组织(ISO)通过并发布。这两项ISO标准是:《ISO/TS20224-10:2024分子生物标记分析——食品和饲......
南京邮电大学汪联辉、高宇及晁洁共同通讯在NatureMaterials在线发表题为“AnintelligentDNAnanodeviceforprecisionthrombolysis”的研究论文,该......
近日,“女娲”基因组团队重点阐释了适应性选择下非编码调控元件对表型演化的影响,相关研究发表于《分子生物学与进化》。这项工作是中国科学院生物物理研究所徐涛院士、何顺民研究员牵头的“女娲”(NyuWa)中......
我们的DNA会不断受到损伤和修复。最严重的损伤发生在DNA断裂成两段时,即DNA双链断裂。它会产生两个松散的DNA末端,如果不加以修复,就会导致细胞死亡。在一项新的研究中,来自德国德累斯顿工业大学生物......
2023年美国质粒DNA制造市场规模达到18968万美元,预计到2033年将达到115044万美元左右,2024年至2033年复合年增长率为19.57%。访问我们的医疗保健数据智能工具,其中包含100......
威康桑格研究所的研究人员及其剑桥大学英国痴呆症研究所的合作者进行了一项新研究,旨在确定细胞健康的生物学原理并确定维持基因组稳定性的关键基因。研究人员通过对近1,000个转基因小鼠品系的系统筛选,发现了......
通过分析基因组中数百万个微小的遗传差异,就可预测一个人一生中患某种疾病的几率。在过去的10年中,研究人员为数十种疾病制定了风险评分,希望有一天患者能利用这些信息来降低患病风险。在《自然·医学》杂志最新......
超高速测序推动基因组诊断快速发展简化的DNA和RNA测序工作流正在帮助临床医生在几天甚至几小时内提供迅速的有针对性的护理 约十年前,澳大利亚墨尔本的默多克......
记国家自然科学基金重大研究计划“基因信息传递过程中非编码RNA的调控作用机制”在人类遗传信息传递过程中,非编码RNA不参与编码蛋白质,占全部RNA的98%,如同宇宙中神秘的“暗物质”,是生命活动调控的......
2024年1月22日,《自然》发布了2024年值得关注的七大技术——大片段DNA插入、人工智能设计蛋白质、脑机接口、细胞图谱、超高分辨率显微成像、3D打印纳米材料和DeepFake检测。七大技术中,生......