3. 结果判定:
除标记物IgG量的计算,略有不同以外,其余均同戊二醛法。
IgG量(mg/ml)=(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62
4. 试剂及器材:
(1) 0.1M NaIO4:称取241mg高碘酸钠(广州化学试剂厂,批号830602)溶于蒸馏水10ml中。
(2) 1mM PH4.4醋酸钠缓冲液:
0.2M NaAc (1.361克/50ml) 3.7ml
0.2M HAc (0.601ml/50ml) 6.3ml
加蒸馏水至2,000ml。
(3) 0.2M PH9.5碳酸盐缓冲液:
Na2CO3 0.32克
NaHCO3 0.586克
加蒸馏水至50ml
再用蒸馏水作20倍稀释,即成0.01M PH9.5的碳酸盐缓冲液。
(4) NaBH4溶液(4mg/ml):
临用时称取NaBH44mg溶于1ml蒸馏水中。
(5) 其它的试剂及器材可参见戊二醛标记法。
四、注意事项
1. 在具备高质量HRP的条件下,所要标记的抗体也要活性高,效价高(最低1∶16),纯度高,亲和力好,这是保证标记物效价高,免疫活性好的首要条件。
2. 所使用试剂的PH和浓度及用量必须严格掌握。所用试剂,最好(或必需)新鲜配制。如在戊二醛标记法中所用戊二醛应为新鲜纯品,因戊二醛储存过久可形成缩和体(杂质)。否则,影响标记效果。
3. 室温搅拌时须避光,室内温度一般在25℃为宜。标记物每次透析前,须认真检查,防止漏液。
4. 浓的标记物相当稳定,常加入30~40%甘油于-10℃下保存。4℃可保存1~2年,但稀释成1∶10,只能保存数周。已配制的使用液应在12小时内用完。切忌反复冻融。