钙调蛋白的溴化氰裂解实验

试剂、试剂盒 甲酸纯的钙调蛋白 溴化氰乙腈

实验步骤

材料

甲酸（市售最髙级（如AldrichChemicalCo.，Inc.)

纯的钙调蛋白（干粉；无盐（0.1~1 mg)

溴化氰（CNBr)(晶体）（如AldrichChemicalCo.，Inc.)

乙腈（如Burdick&Jackson或J,T.Baker)

操作程序

本操作程序是根据Gross和Witkop(1962)的文献修改而成的。

1)用水稀释甲酸至终浓度为70%(w/v)。对于>99％ 的甲酸，用 2.1 ml 甲酸和 0.9 ml 水。对于 88% 的甲酸, 用 2.lml 甲酸和 0.54 ml 水。

2) 将钙调蛋白溶于 70% 甲酸溶液，终浓度1mg/ml, 置冰上。

3) 称重 1.5-ml 具盖聚丙烯离心管。戴手套，于通风橱中，打开 CNBr 瓶，将一小粒晶体移至预称重的离心管中。盖好离心管和 CNBr 瓶。称重装有 CNBr 的离心管，减去离心管重，算出 CNBr 的重量。

4) 将 CNBr 溶于乙腈，终浓度力 6md/L(0.64 g/ml)。记住，应戴手套且只能在通风橱屮打开离心管。

5) 加一等分 CNBr 溶液于钙调蛋白。该等分中 CNBr 的含量应超过钙调蛋白中预期甲硫氨酸残基总摩尔量的 400 倍。

6) 盖紧离心管，彻底混匀。用箔包住离心管避光。室温下，反应混合物于通风橱中孵育 22 h。

7) 于反应混合物中加入等体积的纯水。样品经真空离心至干。然后再将样品重溶于 0.1%(w/v) 三氟乙酸，供 HPLC 或质谱分析。