酵母细胞中质粒的加工实验

实验方法原理

在非选择性生长条件下，大多数大肠杆菌/酵母菌穿梭载体的丢失频率大约1%。 在本方案中含质粒的酵母菌株接种于非选择性平板上以分离质粒并可得到单菌落。然后通过影印到选择性平板上可以鉴别丢失了质粒的菌株

实验材料 含质粒的酵母菌株

试剂、试剂盒 YPD或其他非选择性液体培养基及平板CM缺失成分平板

仪器、耗材 灭菌绒布及影印模板

实验步骤

1) 挑取几个含质粒的酵母菌单克隆，分别接种于10 mL非选择性培养基，30℃培养过夜。如果没有其他的选择，可以用YPD培养基，如果要保留其他不稳定遗传标志或质粒，可以用添加了与可能丢失的可选择标志相应的营养成分的确定成分培养基。

2) 涂布在相应的非选择性平板上以得到单菌落，30℃培养2天。

3) 影印到选择性平板上以确定丢失了质粒选择标志的菌落。将选择性平板和非选择性主平板置30℃培养过夜。